Научная тема: «МЕТОДОЛОГИЯ И РЕЗУЛЬТАТЫ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ ВАКЦИННОГО ШТАММА FRANCISELLA TULARENSIS»
Специальность: 03.02.03
Год: 2011
Отрасль науки: Биологические науки
Основные научные положения, сформулированные автором на основании проведенных исследований:
  1. Комплекс методических приемов, позволяющих переносить плазмиды в бактерии Ftularensis 15/10 методами криотрансформации и мобилизации. Вариант конъюгативной плазмиды pSa, при скрещивании который способен переходить из клеток E. coli в бактерии Ftularensis15/10 и обратно. Методология переноса плазмид в клетки Ftularensis позволяет создавать генетически маркированные штаммы, необходимые для всестороннего изучения факторов иммуногенности и патогенности туляремийного микроба.
  2. Плазмида рFNL10, выделенная из штамма Fnovicida like F6168, способна реплицироваться в Ftularensis и содержит все элементы для репликации по тета-механизму. Наличие в плазмиде рFNL10 генов, кодирующих белки, гомологичные белкам Phd-Doc системы, обуславливает высокую стабильность наследования данной плазмиды бактериями Ftularensis. Плазмида рFNL10 является основой для создания плазмидных векторов для Ftularensis.
  3. Плазмидные векторы для Ftularensis, позволяющие клонировать промоторы и экспрессировать гетерологичные гены протективных антигенов в вакцинном штамме туляремийного микроба. Высокоэффективный способ экспрессии протективных антигенов Mtuberculosis в вакцинном штамме Ftularensis 15/10.
  4. Штаммы Ftularensis,  экспрессирующие микобактериальные антигены Ag85B и ESAT-6, которые индуцируют противотуберкулезный Т‑клеточный иммунный ответ у вакцинированных мышей и создают специфическую защиту мышей на модели легочной формы туберкулеза.
  5. Способ целенаправленного создания вариантов вакцинного штамма Ftularensis с модифицированными генами и делециями в хромосоме, основанный на методе аллельного обмена.
  6. Ген iglC в хромосоме Ftularensis находится в двух копиях. Направленное "выключение" синтеза 23 кДa белка, кодируемого геном iglC, в штаммах Ftularensis 15/10 и LVS приводит к подавлению способности клеток Ftularensis к внутримакрофагальному размножению.
  7. Продукт гена sodB Ftularensis необходим для жизнеспособности туляремийного микроба. Замена инициирующего кодона ATG на GTG в гене sodB приводит к снижению уровня экспрессии гена sodB в клетках Ftularensis. Штамм F. tularensis  FtsodB , несущий модифицированный ген sodB, обладает сниженной вирулентностью для мышей по сравнению с исходным штаммом Ftularensis LVS.
Список опубликованных работ
А) в изданиях, рекомендованных ВАК:

1.Павлов В.М., Мокриевич А.Н. Создание векторной плазмиды для Francisella tularensis // Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1994.- Вып. 4 – № 74. . – С. 191–194.

2.Мокриевич А.Н., Фурсов В.В., Павлов В.М. Криотрансформация туляремийного микроба плазмидной ДНК // Проблемы особо опасных инфекций.- Саратов, 1994. . – Вып. 4 – № 74. – С. 186–190

3.Павлов В.М., Родионова И.В., Мокриевич А.Н., Мещерякова И.С. Выделение и молекулярно-генетическая характеристика криптической плазмиды из Francisella novicida-подобного штамма F6168. // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 1994. – № 3. – С. 39–40.

4.Pavlov V.M., Mokrievich A.N. and Volkovoy K. Cryptic plasmid pFNL10 from Francisella novicida-like F6168: the base of plasmid vectors for Francisella tularensis. // FEMS Immunol. Med. Microbiol. – 1996. – V. 13. P. 253–256.

5.Павлов В.М., Мокриевич А.Н., Носков А.Н. и Ураков Н.Н. Туляремийный вакцинный штамм-потенциальный бактериальный вектор. // Вестн. Мед. Акад. Наук. - 1997. – № 3. – C. 15–17

6.Алимов А.П., Павлов В.М. Патент РФ на изобретение № 2110575 – рекомбинантная плазмидная ДНК pro PF5, определяющая синтез капсульного антигена F1 возбудителя чумы и протективного антигена возбудителя сибирской язвы, и способ конструирования рекомбинантной плазмидной ДНК pro PF5 // Бюллетень № 13 от 10.05.1998.

7.Померанцев А.П., Павлов В.М. // Плазмида pCSE4 для клонирования промотор-содержащих фрагментов ДНК в туляремийном микробе // Вест. РАМН. – 1999. – № 12. – С. 29–32.

8.Pomerantsev A.P., Golovliov I.R., Ohara Y., Mokrievich A.N., Obuchi M., Norqvist A., Kuoppa K., Pavlov V.M. Genetic organization of the Francisella plasmid pFNL10 // Plasmid. – 2001. – V. 46 – N. 3. – P. 210–22.

9.Golovliov I., Sjostedt A., Mokrievich A., Pavlov V. A method for allelic replacement in Francisella tularensis // FEMS Microbiol Lett. – 2003. – V. 222– N. 2. – P. 273–80.

10.Bakshi C.S., Malik M., Regan K., Melendez J.A., Metzger D.W., Pavlov V.M., and Sellati T.J. Superoxide dismutase B gene (sodB)-deficient mutants of Francisella tularensis demonstrate hypersensitivity to oxidative stress and attenuated virulence // J Bacteriol.. – 2006. – V.188. – P. 6443–6448.

11.Кравченко Т.Б., Платонов М.Е., Вахрамеева Г.М., Баннов В.А., Кудрявцева Т.Ю., Мокриевич А.Н., Павлов В.М. Клонирование и экспрессия протективных антигенов Mycobacterium tuberculosis Ag85 и ESAT-6 в клетках Francisella tularensis 15/10 // Биохимия – 2007. – Т.72. - № 7. – С. 905–914.

12.Лапин А.А., Павлов В.М., Мокриевич А.Н., Домотенко Л.В., Храмов М.В. Простая жидкая питательная среда для молекулярно-генетических исследований Francisella tularensis // Пробл. особо опасных инфекций.- Саратов, 2009. – № 102. – С. 66 – 67

13.Мокриевич А.Н., Кондакова А.Н., Валаде Э., Платонов М.Е., Вахрамеева Г.М., Шайхутдинова Р.З., Миронова Р.И., Блаха Д., Бахтеева И.В., Титарева Г.М., Кравченко Т.Б., Комбарова Т.И., Видаль Д., Павлов В.М., Линднер Б., Дятлов И.А., Книрель Ю.А. Биологические свойства и строение липополисахарида вакцинного штамма Francisella tularensis, полученного при инактивации гена системы «чувства кворума» qseC* // Биохимия.– 2010. – Т. 75. – № 4. – С. 539 – 548.

Б) в прочих изданиях:

14.Павлов В.М., Мокриевич А.Н. Клонирование гена Francisella tularensis, кодирующего синтез RecA–подобного белка, в Escherichia coli // Актуальные проблемы профилактики туляремии: Тезисы докладов Всесоюзной конференции. - Симферополь, 1991. - С.142.

15.Никитин А.Н.; Еремин С.А.; Павлов В.М., Дроздов И.Г. Генетическая трансформация туляремийного микроба плазмидной ДНК // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций: Тезисы докладов Всесоюзной конференции. - Волгоград, 1992. - С. 45

16.Родионова И.В., Павлов В.М., Мокриевич А.Н., Мещерякова И.С. Выделение и молекулярно-генетическая характеристика плазмидной ДНК pFNL10 из штамма Francisella novicida-like F 6168 // Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций: Материалы Российской научной конференции.- Саратов, 1993. - С. 302

17.Pomerantsev, A.P., Pavlov V.M., Urakov N.N. Francisella tularensis: behaviour of heterologous plasmids // First International Conference on Tularemia (Aug.23-25, 1995). Umea, Sweden: Abstracts.- 1995.- P. 13

18.Norqvist A., Kuoppa K., Pavlov V.M., Sandström G. Construction and characterization of a cloning vector for use in Francisella tularensis // First International Conference on Tularemia (Aug.23-25, 1995). Umea, Sweden : Abstracts- 1995.- P. 28.

19.Tedikov V.M., Mokrievich A.N., and Pavlov V.M. Cloning of ori pXO1 and pag gene of B. anthracis in Francisella tularensis // Salisbury Med. Bull.- Special Suplement no. 87.- 1996.-P. 98.

20.Pavlov V.M., Mokrievich A.N. and Pomerantsev A.P. Plasmid vectors for vaccine strain Francisella tularensis // Medizinische B-Schutz-Tagung des BWVg 22 und 23 oct. 1997.- 1997.- P. 10.

21.Pavlov V.M. Methodical approaches to designing recombinant live vaccine Francisella tularensis straines // Second International Conference on Tularemia (9-11 oct. 1997, Hradec Kralove, Czech Republic): Vojenske Zdravotnicke Listy.-Suplementum.-1997.- Rocnik LXI. - P. 4-5.

22.Mokrievich A.N., Pavlov V.M., Rodionova I.V., Meshcheryakova I.S. Restriction map of pFNL10 plasmid // Second International Conference on Tularemia (9-11 oct. 1997, Hradec Kralove, Czech Republic): Vojenske Zdravotnicke Listy – Suplementum.- 1997.- Rocnik LXVI. - P. 13-14

23.Pavlov V.M., Mokrievich A.N., Staritsyn N.A., Shishkova N.A. Rec–A like Francisella tularensis strain: Isolation and properties // Second International Conference on Tularemia (9-11 oct. 1997, Hradec Kralove, Czech Republic): Vojenske Zdravotnicke Listy – Suplementum.- 1997.- Rocnik LXVI. - P. 14-15

24.Рomerantsev A.P., Pavlov V.M. Molecular tools for study of transcriptional regulation in Francisella tularensis // Second International Conference on Tularemia (9-11 oct. 1997, Hradec Kralove, Czech Republic): Vojenske Zdravotnicke Listy – Suplementum.- 1997.- Rocnik LXVI. - P. 10

25.Kravchenko T.B., Mokrievich A.N and Pavlov V.M. Immunobiological properties of recombinant vaccine strain of Francisella tularensis producing protective antigen of Bacillus anthracis // 3rd International Conference on Anthrax (University of Plymouth, 7-10 th September 1998): Abstract Book.- 1998.- P. 35.

26.Bannov V.A., Kudriavtseva T.Yu., Mokrievich A.N., Eruslanov B.V., Shishkova N.A., Verevkin V.V., Pomerantsev A.P., Pavlov V.M. Study of OmpS Legionella pneumophyla gene expression in the tularemia microbe vaccine strain // Problems of Medical and Ecological Biotechnology. The International Conference (December 14 - 15). Obolensk, Russia. – 1999.- P. 13.

27.Kravchenko T.B., Titareva G.M., Bakhteeva I.V., Shishkova N.A., Pavlov V.M., Urakov N.N. Study of immune properties of the strain Francisella tularensis synthesizing Omps protein Legionella pneumophyla // Problems of Medical and Ecological Biotechnology. The International Conference (December 14 -15). Obolensk, Russia. – 1999 - P. 81.

28.Kudriavtseva T.Yu., Pavlov V.M., Urakov N.N., Eruslanov B.V. Isolation of Legionella pneumophyla outer membrane protein and analysis of this protein expression by recombinant strains // Problems of Medical and Ecological Biotechnology. The International Conference (December 14 - 15). Obolensk, Russia. – 1999.- P. 87.

29.Pomerantsev A.P., Mokrievich A.N., Golovlev I.P., Pavlov V.M. Nucleotide sequence, structural organization and functional activity of the plasmid pFNL10 specific for bacteria of Francisella species // Problems of Medical and Ecological Biotechnology. The International Conference (December 14 - 15). Obolensk, Russia. – 1999.- Р. 126.

30.Pavlov V.M. Genetics of tularemia microbe. // Problems of Medical and Ecological Biotechnology. The International Conference (December 14 -15). Obolensk, Russia. – 1999.- P. 289.

31.Платонов М.Е., Мокриевич А.Н. и Павлов В.М. Conjugative transfer of plasmid DNA from Escherichia coli into Francisella tularensis // Международная конференция Проблемы биологической и экологической безопасности (22-24 мая). Государственный научный ценр прикладной микробиологии, Оболенск, Россия. – 2000.- С. 76-78.

32.Platonov M., Titareva G., Kravchenko T. and Pavlov V.M. Immunobiological properties of Francisella tularensis with inactivated gene (iglC) encoding 23-kD protein // Fourth International Conference On Tularemia (September 15-19). City of Bath, Great Bretain. - 2003. - P. 48.

33.Mokrievich A.N., Pavlov V.M. 2003. Conjugal transfer pSa plasmid from Escherichia coli in Francisella tularensis. // Fourth International Conference On Tularemia (September 15-19). City of Bath, Great Bretain. - 2003. - P. 49.

34. Platonov M., Mokrievich A., Kravchenko T., Shishkova N., and Pavlov V.M. 2003. Cloning of iron-dependent superoxide dismutase (SodA) of Mycobacterium tuberculosis in Francisella tularensis 15/10 // Fourth International Conference On Tularemia (September 15-19). City of Bath, Great Bretain. - 2003. - P. 50.

35.Мокриевич А.Н, Павлов В.М. Francisella tularensis и межвидовой обмен генетической информации. //Юбилейной научной конференции, посвященной 75-летию НИИ микробиологии МО РФ (Киров, 2003); - 2003. - С. 147.

36.Kravchenko T.B., Mokrievich A.N., Platonov M.E., Vahrameeva G.M., and Pavlov V.M. Development of recombinant Francisella tularensis vaccine strains carrying additional protective antigens. In the book of abstracts of the 1-st International Conference on Environmental, Industrial and Applied Microbiology. Badajoz, Spain, 2005, p.861

37.Platonov M.E., Mokrievich A.N., and Pavlov V.M. Plasmid conjugation and mobilization from Escherichia coli into Francisella tularensis // 1-st International Conference on Environmental, Industrial and Applied Microbiology (March 15-18). Badajoz, Spain. – 2005. - P. 861

38.Платонов М. Е., Мокриевич А. Н., Кравченко Т. Б., Вахрамеева Г. М., Шишкова Н. А., Павлов В. М. Экспрессия генов протективных антигенов туберкулезного микроба в вакцинном штамме Francisella tularensis 15/10 // 3-ий Московский международный конгресс «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (14-18 марта). Москва, Россия. – 2005. - С. 85.

39.Pavlov V.M., Mokrievich A., Platonov M., Kravchenko T. Vachrameeva G., Titareva G., Bakhteeva I., Mironova R., Parra M., Elkins K.L., Brennan M.J. New bacterial vector for Mycobacterium tuberculosis protective antigens // The 2006 NIAID Research Conference (June 24-30). Opatija, Croatia. – 2006.- P. 43

40.Кравченко Т.Б., Мокриевич А.Н., Платонов М.Е., Вахрамеева Г.М., Кудрявцева Т.Ю., Баннов В.А., Миронова Р.И., Комбарова Т.И., Потапов В.Д., Бахтеева И.В., Титарева Г.М., Ганина Е.А, Павлов В.М. Вакцинный штамм Francisella tularensis - новый бактериальный вектор для протективных антигенов Mycobacterium tuberculosis // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита государств «группы восьми» и санитарная охрана территорий государств-участников содружества независимых государств/ VII-я Межгосударственная научно-практическая конференция государств-участников СНГ (3-5 октября). Оболенск, Россия. – 2006. - С. 147-148.

41.Павлов В.М., Кравченко Т. Б., Мокриевич А. Н., Платонов М. Е., Вахрамеева Г. М., Кудрявцева Т. Ю., Баннов В. А., Миронова Р. И., Комбарова Т. И., Потапов В. Д., Бахтеева И. В., Титарева Г. М., Ганина Е. А. Противотуберкулезная протективная активность туляремийного вакцинного штамма с антигенами Mycobacterium tuberculosis 85B И ESAT-6 // Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики и лечения инфекционных болезней» (11-12 ноября). Москва, Россия. - 2008. - С. 95.