- В процессе исследования разработана методика и осуществлено выделение в гомогенном виде двух новых, неописанных ранее белков респираторного эпителия крысы c молекулярными массами 28 и 45 кДа. Впервые установлено, что в слизи обонятельного эпителия в значительных количествах (∼2%) присутствует новый тип тиол-специфических пероксидаз и липид-переносящий белок, Sec14p-подобный белок, несущий в своем составе CRAL/TRIO- или Sec14p-подобный домен.
- На основе информации о частичной аминокислотной последовательности осуществлено клонирование кДНК этих белков. По определенной нуклеотидной последовательности установлена полная первичная структура этих белков, состоящая из 223 и 400 аминокислотных остатков, соответственно. Установлено, что тиол-специфическая пероксидаза принадлежит к семейству пероксиредоксинов VI и в ее составе идентифицирован домен, способный защищать белки от разрушения активными формами кислорода, подобно полноразмерному ферменту. Изучены особенности химического строения Prx VI и показано, что белок не гликозилирован; отсутствие посттрансляционной модификации имеет важное значение для проявления белком протекторной активности.
- Впервые показано, что наибольшая концентрация этих белков обнаруживается в тканях, имеющих непосредственный контакт с атмосферой и больше, чем другие, подверженных воздействию неблагоприятных внешних факторов. На основании полученных данных сделано предположение, что эти белки входят в состав защитных систем эпителиальных тканей и обеспечивают их нормальный контакт с окружающей средой.
- Нами установлено, что ключевой посредник сигнальных путей фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфат является специфическим липидным лигандом Sec14p-подобного белка тканей респираторной системы. Доказана колокализация этих веществ в клетках млекопитающих и выявлено участие липид-связывающего Sec14p-подобного белка в секреторном процессе. Впервые продемонстрирована транспортная активность Sec14p-подобного белка млекопитающих и возможность переноса фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфата во внеклеточную среду.
1.Липкин В.М., Шуваева Т.М., Розынов Б.В. Анализ химического строения белка; в кн. «Проблема белка», т. 1, под ред. В.М. Липкина. М: Наука, 1995, стр. 291-354.
2.Липкин В.М., Шуваева Т.М. Белки; в кн. «Большая Российская энциклопедия», т. 3, М.: Большая Российская энциклопедия, 2005, стр. 211-215.
Статьи (в журналах, рекомендованных ВАК и включенных в систему цитирования Web of Science)
3.Пешенко И.В., Новоселов В.И., Евдокимов В.А., Попов В.И., Николаев Ю.В., Шуваева Т.М., Липкин В.М., Фесенко Е.Е. Выделение и биохимический анализ нового секреторного 28-кДа белка из обонятельного эпителия крысы. Сенсорные системы 1996, 10 (3), 97-109.
4.Peshenko I.V., Novoselov V.I., Evdokimov V.A., Nikolaev Yu.V., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M., Fesenko E.E. Novel 28-kDa secretory protein from rat olfactory epithelium. FEBS Lett. 1996, 381 (1), 12-14.
5.Peshenko I.V., Novoselov V.I., Evdokimov V.A., Nikolaev Yu.V., Kamzalov S.S., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M., Fesenko E.E. Identification of a 28 kDa secretory protein from rat olfactory epithelium as a thiol-specific antioxidant. Free Radical Biology & Medicine 1998, 25 (6), 654-659.
6.Андреева С.Г., Меркулова М.И., Шуваева Т.М., Новоселов В.И., Пешенко И.В., Новоселов С.В., Фесенко Е.Е., Липкин В.М. Структурные исследования секреторного 28-кДа белка из обонятельного эпителия крысы. Биоорган. химия 1998, 24 (11), 816-821.
7.Novoselov S.V., Peshenko I.V., Popov V.I., Novoselov V.I., Bystrova M.F., Evdokimov V.A., Kamzalov S.S., Merkulova M.I., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M., Fesenko E.E. Localization of 28-kDa peroxiredoxin in rat epithelial tissues and its antioxidant properties. Cell Tissue Res. 1999, 298 (3), 471-480.
8.Shuvaeva T.M., Andreeva S.G., Merkulova M.I., Novoselov V.I., Peshenko I.V., Fesenko E.E., Lipkin V.M. Novel 28 kD and 45 kD olfactory enzymes:structure and functions. J. Neurochemistry 1999, 73 (suppl.), S46.
9.Меркулова М.И., Шуваева Т.М., Радченко В.В., Янин В.А., Бондарь А.А., Софин А.Д., Липкин В.М. Рекомбинантный пероксиредоксин человека: получение и протекторные свойства in vitro. Биохимия 2002, 67 (11), 1496-1501.
10 Radchenko V.V., Nekrasov A.N., Shuvaeva T.M., Merkulova M.I., Lipkin V.M. Analysis of informational structure of protein amino acid sequences and obtaining large biologically active peptides of human 1-Cys peroxyredoxin. J. Peptide Sci. 2004, 10 (8), 258.
11.Merkulova M.I., Andreeva S.G., Shuvaeva T.M. Novoselov S.V., Peshenko I.V., Bystrova M.F., Novoselov V.I., Fesenko E.E., Lipkin V.M. A novel 45 kDa secretory protein from rat olfactory epithelium: primary structure and localisation. FEBS Lett. 1999, 450 (1-2), 126-130.
12.Меркулова М.И., Радченко В.В., Ильницкая Е.В., Шуваева Т.М., Липкин В.М. Протеомный подход к изучению функций Sec14р-подобного белка р45. Биоорган. химия 2005, 31 (3), 280-287.
13.Радченко В.В., Шуваева Т.М., Ильницкая Е.В., Третьяков В.Е., Липкин В.М. Новый метод изучения липидного транспорта in vitro: белок с молекулярной массой 45 кДа из обонятельного эпителия крысы – специфический переносчик фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфата. Биоорган. химия 2005, 31 (4), 445-448.
14.Merkulova M., Huynh H, Radchenko V., Saito K., Lipkin V., Shuvaeva T., Mustelin T. Secretion of the mammalian Sec14p-like phosphoinositide-binding p45 protein. FEBS Journal 2005, 272 (10), 5595-5605.
15.Радченко В.В., Меркулова М.И., Шуваева Т.М., Симонова Т.Н., Бондарь А.А., Липкин В.М. Функциональная экспрессия Sec14р-подобного белка с молекулярной массой 45 кДа из обонятельного эпителия крысы. Биохимия 2005, 70 (12), 1631-1638.
16.Ильницкая Е.В., Шамборант О.Г., Радченко В.В., Шуваева Т.М., Липкин В.М. Связывание Sec14-подобного белка с молекулярной массой 45 кДа из обонятельного эпителия крысы с фосфатидилинозит-3,4,5-трифосфатом в липосомах. Биоорган. химия 2006, 32 (3), 335-336.
17.Nekrasov A. N., Radchenko V.V., Shuvaeva T.M., Novoselov V.I., Fesenko E.E., Lipkin V.M. The novel approach to the protein design: active truncated forms of human 1-Cys peroxiredoxin. Journal of Biomolecular Structure & Dynamics 2007, 24 (5), 455-462.
Материалы конференций
18.Шуваева Т.М., Андреева С.Г., Меркулова М.И., Пешенко И.В., Новоселов В.И., Фесенко Е.Е., Липкин В.М. Новые секреторные белки обонятельного эпителия крысы. IV Чтения, посвященные памяти академика Ю.А. Овчинникова, Москва 1998. Тез. докл. и стенд. сообщ., С. 33.
19.Новоселов В.И., Пешенко И.В., Попов В.И., Новоселов С.В., Быстрова М.Ф., Евдокимов В.А., Камзалов С.С., Меркулова М.И., Шуваева Т.М., Липкин В.М., Фесенко Е.Е. Локализация пероксиредоксина с молекулярной массой 28 кДа в эпителиальных тканях крысы и его антиоксидантные свойства. II Съезд биофизиков России, Москва 1999. Тез. докл. и стенд. сообщ., XIII.1.9.
20.Novoselov V.I., Peshenko I.V., Bystrova M.F., Evdokimov V.J., Novoselov S.V., Kamzalov S.S., Shuvaeva T.M., Merkulova M.I., Andreeva S.G., Lipkin V.M., Fesenko E.E. Novel secretory proteins from rat epithelium tissues. INTAS Symposium “Microbial and Cellular Systems for Pharmacology, Biotechnology, Medicine and Environment”, Moscow 1999. Proceeding book, P. 32.
21.Merkulova M.I., Novoselov S.V., Peshenko I.V., Novoselov V.I., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M. The novel transfer protein from rat olfactory epithelium. NATO-FEBS Meeting “Protein, lipid and membrane traffic: pathways and targeting”, Cargese-Corsica-France 1999, Abstr.
22.Шуваева Т.М., Меркулова М.И., Новоселов В.И., Бондарь А.А., Радченко В.В., Липкин В.М. Структурно-функциональное изучение пероксиредоксина VI и создание на его основе лекарственных препаратов. Х Международная конф. «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф 2002. Тез. докл., С. 345.
23.Радченко В.В., Меркулова М.И., Евдокимов В.А., Барышникова Л.М., Шуваева Т.М., Липкин В.М. Получение в прокариотических системах экспрессии рекомбинантного белка 45 кДа из обонятельного эпителия крысы и гомологичного ему белка 45 кДа человека. Х Международная конф. «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф 2002. Тез. докл., С. 376-377.
24.Меркулова М.И., Huynh H., Радченко В.В., Липкин В.М., Шуваева Т.М., Mustelin T. Секреция SEC14р-подобного белка из обонятельного эпителия крысы. VII Чтения, посвященные памяти академика Ю.А. Овчинникова, Москва 2004. Тез. докл. и стенд. сообщ., С. 52-53.
25.Радченко В.В., Меркулова М.И., Шуваева Т.М., Липкин В.М. Фосфатидилинозит- связывающий домен SEC14р-подобного белка из обонятельного эпителия крысы. VII Чтения, посвященные памяти академика Ю.А. Овчинникова, Москва 2004. Тез. докл. и стенд. сообщ., С. 54.
26.Nekrasov A.N., Radchenko V.V., Merkulova M.I., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M. Expression of recombinant truncated forms of human peroxiredoxin (1-Cys PrxVI) designed using a structural-information analysis of its amino acid sequence. 7th Int. Symp.on Biomol. Chem., Sheffield 2004, The United Kingdom, Abstr., P. 24.
27.Radchenko V.V., Nekrasov A.N., Shuvaeva T.M., Merkulova M.I., Lipkin V.M. Analysis of informational structure of protein amino acid sequences and obtaining large biologically active peptides of human 1-Cys peroxyredoxin. J. Peptide Sci. 2004, 10 (8), 258.
28.Radchenko V.V., Nekrasov A.N., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M. Information structure analysis of protein sequences. Design and purification of recombinant truncated forms of human 1-Cys peroxiredoxin. Moscow Conference on computational molecular biology, Moscow 2005, Abstr. P. 311-313.
29.Шуваева Т.М., Новоселов В.И., Радченко В.В., Ильницкая Е.В., Фесенко Е.Е., Липкин В.М. Новые белки обонятельного эпителия млекопитающих. VIII Чтения, посвященные памяти академика Ю.А. Овчинникова, Москва 2006. Тез. докл. и стенд. сообщ., С. 9.
30.Radchenko V.V., Il’nitskaya E.V., Shuvaeva T.M., Tret’yakov V.E., Lipkin V.M. A new method for lipid transport studying in vitro: The tool for identification unknown lipid binding proteins and their hydrophobic ligands determining lipid metabolism pathology. Special meeting “New concepts in lipidology: from lipidomics to disease”, Noordwijkerhout 2006, The Netherlands. Abstr., P. 109.
Патенты
31.Липкин В.М., Шуваева Т.М., Радченко В.В., Меркулова М.И., Новоселов В.И., Фесенко Е.Е. Рекомбинантная плазмидная ДНК pET23-a(+)PrxVIhumΔ178, кодирующая N-концевой фрагмент пероксиредоксина VI человека, и штамм E. coli BL21/DE3/pET23-a(+)/PrxVIhumΔ178 – продуцент N-концевого фрагмента пероксиредоксина VI человека. Патент РФ № 2250262, 20.04.2005.
32.Fesenko E.E., Novoselov V.I., Yanin V.A., Lipkin V.M., Shuvaeva T.M. Antioxidant pharmaceutical compound, method for producing polypeptide and method of cure. PCT WO 2004/043485 A1, 27.05.2004.
33.Радченко В.В., Шуваева Т.М., Ильницкая Е.В., Липкин В.М. Способ определения липидпереносящей способности белков. Патент РФ № 2302426, 10.07.2007.