1. Создание оригинальной коллекции гибридом, которые и в настоящее время могут быть успешно использованы как штаммы-продуценты, секретирующие моноклональные антитела к структурным белкам вирусов патогенных для человека, позволяет обеспечивать научные и экспериментально-производственные исследования стабильными, очищенными, гомогенными и высокоаффинными препаратами антител с определенной специфичностью.
2. Наборы очищенных препаратов МКА с изученными свойствами, панели МКА, могут быть успешно использованы для изучения структурных белков вирусов патогенных для человека, включая филовирусы (вирусы Марбург и Эбола), флавивирусы (вирус Западного Нила), ортопоксвирусы (ВЭм, ВОВ, ВОК и ВНО).
3. Нуклеокапсидные, NP и VP35, и матриксные VP40 белки филовирусов играют значительную роль в формировании защитного иммунного ответа организма: так в процессе развития филовирусной инфекции иммунный ответ у переболевших животных формируется, прежде всего, на нуклеокапсидные, NP и VP35, и VP40 матриксный белки филовирусов, что, возможно, является определяющим фактором выживания.
4. Белки слияния ВЭм (ген 129L), ВОВ (ген A27L), ВОК и ВНО (ген A30L) содержат общие перекрестно-реактивные эпитопы, способные индуцировать синтез В-клетками вируснейтрализующих антител против ВОВ и вируса натуральной оспы.
5. Современные штаммы ВЗН, циркулирующие в Евразии, обладают значительными антигенными отличиями: с помощью панели МКА против штамма Vlg99-27889, выделенного в 1999 году в Волгограде, на структурных белках ВЗН выделено не менее 13 различных эпитопов (11 из которых расположено на Е гликопротеине). Кроме того, выявлены максимальные антигенные различия в реакции нейтрализации у штаммов Hp-94 (год выделении 1963) и Tur-2914 (год выделении 1973), у которых, по-видимому, изменено по 7 эпитопов на белке Е ВЗН.
6. Получены МКА, которые обладают нейтрализующей активностью против 7 исследованных штаммов ВЗН, являются перспективными для создания иммунодиагностических наборов и, возможно, для разработки препаратов для иммунотерапии тяжелых случаев лихорадки Западного Нила. Так, на наш взгляд, высоко активные нейтрализующие гуманизированные антитела Fc-9E2 привлекательны для будущего конструирования и создания нового антивирусного препарата для лечения лихорадки Западного Нила.
7. Используемая нами методология, включающая объединенное применение двух инструментов исследования, панели МКА и набора антисывороток, а также рекомбинантных белков и их фрагментов, с изученными свойствами, позволяет расширить наши возможности при картировании и перейти к локализации эпитопов связывания с МКА на аминокислотной последовательности вирусных белков.
1. Pereboev A, Borisevich V, Tsuladze G, Shakhmatov M, Hudman D,
Kazachinskaia E, Razumov I, Svyatchenko V, Loktev V, Yamshchikov V.
Genetically delivered antibody protects against West Nile virus //Antiviral Res. –
2008.- Vol.7, N1. – P.6-13.
2. Razumov I.A., E.I. Kazachinskaia, V.A. Ternovoi, E.V. Protopopova, I.V.
Galkina*, V.L. Gromashevskii*, A.G. Prilipov*, D.K. L´vov*, and V.B. Loktev .
Neutralizing monoclonal antibodies against Russian Strain of the West Nile Virus.
//Viral Immunology. - 2005, V.18. N3. - P. 558-568.
3. Разумов И.А, И.П. Гилева, М.А. Васильева, Т.С. Непомнящих, М.Н.
Мишина, Е.Ф. Беланов, Г.В. Кочнева, Е.Е. Коновалов, С.Н. Щелкунов и В.Б.
Локтев. Нейтрализующие моноклональные антитела перекрестно реагируют
с белками слияния вирусов эктромелии (ГЕН 129L) и натуральной оспы
(ГЕН A30L) //Мол. Биология – 2005. - том 39, № 6. - C.1046-1054.
4. Разумов И.А., М.А. Васильева, О.А. Серова, Л.В. Артемьева, Н.И.
Бормотов, Е.Ф. Беланов, Г.В. Кочнева, Е.Е. Коновалов, В.Б. Локтев.
Изучение нейтрализующей активности и перекрестного реагирования
моноклональных антител к вирусу эктромелии с патогенными для человека
ортопоксвирусами //Вестник РАМ. – 2004. - том 8. - C. 19-22.
5. Т.Н. Рудзевич, В.А.Терновой, Е.И. Казачинская, И.А. Разумов, А.А.
Чепурнов, В.Б. Локтев, С.В. Нетёсов. Выявление антигенных детерминант
на N-конце белка VP35 вируса Эбола с помощью коротких рекомбинантных
фрагментов этого белка //Молекулярная генетика, микробиология и
вирусология. – 2003. - № 2. v- C. 38-41.
6. A.V. Sorokin, E.I. Kazachinskaia, A.V. Ivanova, A.V. Kachko, S.V. Netesov,
A.A. Bukreyev, V.B. Loktev, and I.A. Razumov, Mapping of two dominant sites
of VP35 of Marburg virus. //Viral Immunology. – 2002 - V.15/ - P. 481-492.
7. T. Cheusova, A.V. Kachko, A.V. Sorokin, E.I. Kazachinskaia, I. Cheshenko, I.
Razumov, S.V. Netesov, E. Ryabchikova . Studies of the expression of Marburg
virus recombinant nucleoprotein. //G.I.T. Imaging & Microscopy – 2002. - V.4 -
P. 26-27.
8. Казачинская Е. И., В. А. Терновой, Т. Н. Рудзевич, С. В. Нетесов, А. А.
Чепурнов, И. А. Разумов. Исследование антигенной структуры белка VP35
вируса Эбола. //Вопр. Вирусологии. – 2001 - том 46, № 5. - C.25-31.
9. Разумов И.А., Е.Ф. Беланов, Н.И. Бормотов, Е.И. Казачинская. Выявление
противовирусной активности моноклональных антител, специфичных к
белкам вируса Марбург//Вопр. Вирусологии. – 2001. - т.46, №1, - с.33-37.
10. Качко А.В., Т.Б. Чеусова, А.В. Сорокин, Е.И. Казачинская, И.О. Чешенко,
Е.Ф. Беланов, А.А. Букреев, А.В. Иванова, И.А Разумов, Е.И. Рябчикова, С.В
Нетесов. Сравнительное изучение морфологии и антигенных свойств
рекомбинантных аналогов нуклеопротеина вируса Марбург //Мол. Биология.
- 2001, том 35, № 3. - C.492-499.
11. . Казачинская Е.И, А.В. Перебоев, А.А. Чепурнов, Е.Ф, Беланов, И.А.
Разумов. Моноклональные антитела к вирусу Эбола: получение,
характеристика и изучение перекрестной реактивности с вирусом Марбург
//Вопр. Вирусологии. – 2000. - т.45, N3.- C.40-44.
12. Ivan V. Surovtseva, Ivan A. Razumovb, V.M. Nekrasov, Alexander N. Shvalovc
J.T. Soini, V.P. Maltsev, A.K. Petrov, V.B. Loktev and A.V. Chernyshev
Mathematical modeling the kinetics of cell distribution in the process of ligandreceptor
binding //J.theor. Biol. – 2000. - V.206, N3 - P. 407-417.
13. А.В.Сорокин, Е.И. Казачинская , А.В Качко, А.В. Иванова, А.А. Букреев ,
И А.Разумов. Сравнительное исследование антигенных и иммуногенных
свойств природного и рекомбинантного белков VP35 вируса Марбург
//Вопр. Вирусологии. - 1999.-т.44, N5.- C.274-279.
14. Ivan V. Surovtseva, Ivan V. Razumovb, Alexander N. Shvalovc Kinetic study of
formation of antigen-antibody complexes on the cell surface with the scanning
flow cytometry //SPIE Proceedings. - 1999 - Vol.3604. - P. 199-206.
15. Разумов И.А., Е.Ф. Беланов, А.А. Букреев, Казачинская Е.И.
Моноклональные антитела к белкам вируса Марбург и их
иммунохимическая характеристика //Вопр. Вирусологии. – 1998. N6. -
C.274-279.
16. Кузьмичева Г.А., Кувшинов В.Н., Разумов И.А., Иванисенко В.А.,
Ерошкин А.М., Мишин В.П., Ушакова Т.А., Локтев В.Б., Ильичев А.А.,
Сандахчиев Л.С. Использование фаговой библиотеки пептидов в
картировании группоспецифического гемагглютинирующего домена
гликопротеина Е2 альфавирусов //Молекулярная генетика, микробиология и
вирусология. – 1997. N4-C.25-29.
17. Кузьмичева Г.А., Кувшинов В.Н., Разумов И.А., Иванисенко В.А.,
Ерошкин А.М., Мишин В.П., Орешкова С.Ф., Локтев В.Б., Ильичев А.А.,
Сандахчиев Л.С. Локализация группоспецифического,
гемагглютинирующего эпитопа гликопротеина Е2 альфавирусов с помощью
фаговой библиотеки пептидов //ДАН РФ. - 1997-Т.352, N1.-C.112-116.
18. Pereboev A.V., I.A.Razumov, V.A.Svyatchenko, V B Loktev. Glycoprotein E2
of the Venezuelan and Eastern equine encephalomyelitis viruses contain multiple
cross-reactive epitopes //Arch.Virology. – 1996. - Vol.141, N. 11. – P.2191-2205.
19. Лифке В.В., И.А. Разумов, С.Н. Коновалова. Моноклональные
антиидиотипические антитела, имитирующие антигенную детерминанту
сайта гемагглютинации гликопротеина Е2 вируса ВЭЛ //Вопр. вирусологии.-
1997. - Т.42,N1 - C.19-23.
20. Ильичев А.А. Меламед Н.В., Разумов И.А., Максютов И.А., Перебоев
А.В., Закабанин А.И., Локтев В.Б. (1996). Изучение экспресии фрагментов
гена белка Е2 вируса ВЭЛ в системе основанной на РНК-полимеразе фага Т7
//Мол. биология 1996. - T. 30, вып 1. - С. 76-83.
21. Шпилевая М.В., Кущ А.А., Разумов И.А., Архипов В.Н., ЦилинскийЯ.Я.,
Локтев В.Б. (1995). Эпитопная специфичность и протективная активность
моноклональных антител к вирусу венесуэльского энцефаломиелита
лошадей //Вопр. Вирусологии. - 1995, т. 40. N 2- С. 82-85.
22. Разумов И.А., Т.Н.Разумова Изучение роли моноклональных антител к
вирусу ВЭЛ в качестве специфических активаторов in vivo
иммунокомпетентных клеток, выявляемых in vitro //Вопр. вирусологии.-
1995.N3.- C.106-109
23. E.V. Agapov, I.A. Razumov, I.V. Frolov, A.A. Kolykhalov, S.V. Netesov
and V.B. Loktev. Localization of four antigenic sites involved in Venezuelan
Equine Encephalomyelitis virus protection //Arch.Virology.- 1994.-Vol.139.N1-
2.- P.173-181.
24. Razumov I.A., A.D.Khusainova, E.V.Agapov, S.Ya.Gaidamovich,
A.V.Pereboev, A.A.Kolykhalov, S.V.Netesov & V.B.Loktev, The study of the
hemagglutination activity domains of VEE and EEE viruses //Intervirology. -
1994. - Vol.37, N6.- P. 356-360.
25. Святченко В.А., Перебоев А.В., Агапов Е.В., Разумов И.А., и др.
Изучение антигенной структуры вируса ВЭЛ. Картирование сайтов Е2-2 и
Е2-6 гликопротеина Е2 с помощью пептидов //Вопр. Вирусологии. – 1993. -
T.38, N4- P.162-167.
26. Перебоев А.В., Святченко В.А., Агапов Е.В., Разумов И.А., и др.
Изучение антигенной структуры гликопротеинов Е1 и Е2 вируса ВсЭЛ при
помощи МКА //Вопр. Вирусологии.- 1993. - T.38, N3. - P.117-122.
27. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В,. Протопопова Е.В., Лебедева
С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры вируса ВЭЛ при помощи
моноклональных антител. 1. Получение гибридом и антигенная структура
белка Е1 вируса ВЭЛ //"Итоги науки и техники" сер. Вирусология. -1992 -
т.28, часть 2 - "Арбовирусы и арбовирусные инфекции" под ред.
Д.К.Львова,-Москва - С. 66-72.
28. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В,. Протопопова Е.В., Лебедева
С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры вируса ВЭЛ при помощи
моноклональных антител. 1. Антигенная структура белка Е2 и протективная
активность моноклональных антител // "Итоги науки и техники" сер.
Вирусология, - - 1992 -т.28, часть 2 - "Арбовирусы и арбовирусные
инфекции" под ред. Д.К.Львова,-Москва - С. 73-80.
29. Агапов Е.В., Лебедева С.Д., Разумов И.А., Фролов И.В., Колыхалов А.А.,
Локтев В.Б., Нетесов С.В., Сандахчиев Л.С., 1991, Варианты вируса ВЭЛ,
резистентные к нейтрализующему действию моноклональных антител.
//Доклады Академии наук СССР. - 320, N 6. - C.1485 -1488.
30. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В., Протопопова Е.В. Лебедева
С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры гликопротеина Е1 вируса
Венесуэльского энцефаломиелита лощадей с помощью моноклональных
антител //Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 1991.N.6
– C. 21-24.
31. Разумов И.А., Агапов Е.В., Протопопова Е.В., Локтев В.Б. Изучение
антигенной структуры альфавирусов при помощи моноклональных
антител //"Итоги науки и техники" сер. Вирусология. - 1991 T.24 -
"Арбовирусы и арбовирусные инфекции" под ред. Д.К.Львова,- Москва. -
С. 54-57.
32. Разумов И.А., Агапов Е.В., Перебоев А.В., Протопопова Е.В., Лебедева
С.Д., Локтев В.Б. Изучение антигенной структуры гликопротеина Е2 вируса
Венесуэльского энцефаломиелита лошадей с помощью крысиных
моноклональных антител //Вопросы вирусологи. – 1991. Т.36. N 1 - C.34-37.
33. Разумов И.А., Перебоев А.В., Агапов Е.В.,Протопопова Е.В., Хусаинова
А.Д., Агапов Е.В., Мельникова Е.Э., Гайдамович С.Я., Локтев В.Б.
Изучение рецепторной области вируса Венесуэльского энцефаломиелита
лошадей при помощи моноклональных антител //Вопросы вирусологии. –
1991. T.36, N. 6. - C.489 - 492.
34. Razumov I A, Agapov E V, Pereboev A V, Protopopova E V, Lebedeva S D,
Loktev V.B. Investigation of antigenic structure of attenuated and virulent
Venezuelan equine encephalomyelitis virus by of monoclonal antibodies
//Biomedical Science -1991.Vol.2 - P. 610-615.
35. Гайдамович С.Я., Локтев В.Б., Лаврова Н.А., Максютов А.З., Мельникова
Е.Е., Перебоев А.В., Протопопова Е.В., Разумов И.А., Свешникова Н.А.,
Хусаинова А.Д. Моноклональные антитела перекрестно реагирующие с
вирусом клещевого энцефалита и вирусом Венесуэльского
энцефаломиелита лошадей. //Вопр. Вирусологии. - 1990.№3. – C.221-225.
ПАТЕНТЫ.
1. Васильева М.А., Разумов И.А., Локтев В.Б., Беланов Е.Ф.,. Коновалов
Е.Е. «Штамм гибридных клеток животного Rattus norvegicus L. 122H9 -
продуцент перекрестно-реактивных нейтрализующих моноклональных
антител против ортопоксвирусов патогенных для человека» Патент РФ
на изобретение № 2265658 (Заявка на патент №2004126520, приоритет
от 01.09.2004.
2. Казачинская Е.И, Алексенко Т.П., Разумов И.А, Протопопова Е.В.,
Локтев В.Б. «Штамм гибридных клеток животного Mus musculus L. 9Е2,
используемый для получения моноклональных антител к белку Е
вируса Западного Нила штамм WNV/LEIV-Vlg99-27889». Патент РФ №
2265658 (заявка на патент №2004100930, приоритет от 09.01.2004).
3. .А.В. Сорокин, И.А. Разумов.,Е.И. Казачинская, А.В. Качко,А.В.
Иванова, В.П. Мишин,А.А. Букреев, Е.Ф. Беланов, , С.В.Нетесов,
В.Б.Локтев Рекомибинантная плазмидная ДНК Q_f35, кодирующая
гибридный полипептид f35, обладающий антигенными и
иммуногенными свойствами белка VP35 вируса Марбург, способ ее
получения, и штамм бактерий E.Coli – сверхпродуцент
рекомбинантного полипептида f35. Патент РФ 2144565. Положительное
решение формальной экспертизы по заявке N 98120373 от 12 ноября
1998.
4. Е.И. Казачинская, И.А. Разумов, В.Б. Локтев. Заявка на изобретение:
"Штамм гибридных культивируемых клеток животного Rattus
norvegicus, используемый для получения моноклональных антител к
вирусу гепатита А человека." Патент РФ № 2142507 Положительное
решение формальной экспертизы от 11.08.97 по заявке на патент РФ N
97107909. от 13.05.97