- С применением комплексного подхода, учитывающего дополнительные сведения о факторах иммуногенности и патогенности B. anthracis и использующего рекомбинантные технологии, создана экспериментальная система для конструирования сибиреязвенных вакцин. Ее компонентами являются: коллекция протеазодефицитных и аспорогенных бесплазмидных производных вакцинных штаммов B. anthracis; генно-инженерные бациллярные штаммы с высокой продукцией биологически активного протективного антигена, в том числе - стабильный аспорогенный продуцент; очищенные препараты рекомбинантного протективного антигена и белков S-слоя сибиреязвенного микроба; высокоиммуногенный штамм B. anthracis с клонированным геном pag.
- Рекомбинантные штаммы B. anthracis СТИDТПА-1, B. anthracis 55ΔТПА-1 и B. subtilis WB600ПА-1 - безопасные, стабильные и эффективные продуценты протективного антигена сибиреязвенного микроба. Генно-инженерные штаммы не содержат детерминанты синтеза основных факторов вирулентности возбудителя сибирской язвы, сохраняют биологические свойства при пассировании в селективных условиях и секретируют в пять раз больше иммуногенного антигена, чем вакцинные культуры B. anthracis СТИ-1 и B. anthracis 55.
- Генно-инженерные штаммы с гибридным репликоном pUB110PA-1 обладают высокой иммунологической эффективностью. Однократная иммунизация биомоделей (мышей линии BALB/с, морских свинок) дозой 3 - 5 × 107 спор рекомбинантных штаммов B. anthracis СТИDТПА-1и B. subtilis WB600ПА-1 вызывает развитие напряженного иммунитета с высокими значениями титров антител к протективному антигену и эффективно защищает от заражения тест-штаммом возбудителя сибирской язвы.
- Рекомбинантный аспорогенный штамм B. anthracis 55DТПА-1(Spo-) при пассировании in vitro не реверсирует к спорообразующему фенотипу и в селективных условиях сохраняет способность к репликации гибридной плазмиды, определяя концепцию экологичной и безопасной технологии производства химической сибиреязвенной вакцины. Генно-инженерный штамм синтезирует биологически активный протективный антиген - двукратная иммунизация дозой 50 мкг очищенного рекомбинантного продукта обеспечивает защиту 100 % кроликов от заражения 50 ЛД50 высоковирулентного штамма возбудителя сибирской язвы.
- Белки S-слоя B. anthracis являются дополнительными факторами иммуногенности хромосомной детерминации на основании изучения протективных свойств очищенных белковых препаратов и изогенных Sap+ и Sap- штаммов B. anthracis. Спонтанные или индуцированные мутации в штаммах B. anthracis, приводящие к смене фенотипа со спорообразующего на аспорогенный, сопровождаются снижением на 1 - 3 порядка степени их патогенности для белых мышей.
2.Степанов А.С., Микшис Н.И., Шевченко О.В., Еремин С.А., Болотникова М.Ф. Изучение феномена внутриштаммовой гетерогенности возбудителя сибирской язвы // Гомеостаз и инфекционный процесс: Тезисы докладов 2-ой Всероссийской конференции. - Саратов, 1998. - С. 66.
3.Mikshis N., Yeremin S., Shevchenko O., Bolotnikova M., Stepanov A. Influence of chromosome mutations on Bacillus anthracis virulence // 3rd Internetional Conference on Anthrax (19 - 21 September). University of Plymouth. England. - 1998. - P. 61.
4.Микшис Н.И., Еремин С.А., Шевченко О.В., Болотникова М.Ф., Липницкий А.В., Барков А.М. Влияние спонтанных хромосомных мутаций на вирулентность возбудителя сибирской язвы // Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных болезней. Биотехнология. Ветеринария: Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. - Киров, 1998. - С. 165-166.
5.Микшис Н.И., Шевченко О.В., Еремин С.А., Болотникова М.Ф., Михеева Т.А., Степанов А.С. Популяционная гетерогенность штаммов Bacillus anthracis // Деп. в ВИНИТИ 04.06.98. № 1722 - В.98.
6.Степанов А.С., Микшис Н.И., Еремин С.А., Болотникова М.Ф. Выяснение участия детерминантов, локализованных в составе хромосомы B. anthracis, в реализации патогенных свойств возбудителя сибирской язвы // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 1999. - № 1. - С. 20-23.
7.Микшис Н.И., Еремин С.А., Болотникова М.Ф. Корреляция вирулентности Bacillus anthracis с экспрессией признаков, кодируемых хромосомными генами // Мо¬ле¬кулярная ге¬нетика, мик¬ро¬биология и ви¬ру¬сология. - 1999. - № 4. - С. 25-28.
8.Микшис Н.И., Степанов А.С., Шевченко О.В., Еремин С.А. Изучение феномена внутриштаммовой гетерогенности возбудителя сибирской язвы //Жур¬на¬л мик¬ро¬био¬ло¬гии, эпи¬де¬мио¬ло¬гии и им¬му¬но¬био¬ло¬гии. - 1999. - № 3. - С. 78-79.
9.Микшис Н.И., Еремин С.А., Шевченко О.В., Болотникова М.Ф. Выделение спонтанных мутантов Bacillus anthracis, различающихся по протеолитической, гемолитической активности, способности к сорбции пигмента и спорообразованию // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. - Саратов, 1999. - С. 13.
10.Mikshis N., Bolotnikova M., Yeremin S., Popov Yu. Search of Bacillus anthracis chromosome determinants of virulence // The 2nd International workshop of the molecular biology of Bacillus cereus, Bacillus anthracis and Bacillus thuringiensis. Taos, New Mexico, USA (August 11-13). - 1999. – P. 10.
11.Микшис Н.И., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В. Изучение вирулентности рекомбинантного штамма Bacillus anthracis, полученного в результате трансдукционной передачи хромосомных генов из штамма Bacillus cereus // Мо¬ле¬кулярная ге¬нетика, мик¬ро¬биология и ви¬ру¬сология. 2000. - № 4. - С. 12-15.
12.Микшис Н.И., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Дармов И.В., Дроздов И.Г. Получение аспорогенных штаммов B. anthracis // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. - Саратов, 2001. - С. 8.
13.Попов Ю.А., Микшис Н.И. Сибиреязвенные вакцины // Проблемы особо опасных инфекций. - 2002. - №1(83). - С. 21-36.
14.Микшис Н.И., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Коннов Н.П., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Получение спонтанных и индуцированных аспорогенных мутантов Bacillus anthracis // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. - Саратов, 2002. - С. 16-17.
15.Попов Ю.А., Микшис Н.И., Еремин С.А., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Киреев М.Н., Коннов Н.П. Изучение хромосомных факторов патогенности и иммуногенности возбудителя сибирской язвы // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. - Саратов, 2002. - С. 29-30.
16.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В., Дармов И.В. Патент РФ на изобретение № 2180349 – штамм Bacillus anthracis КМ89 – продуцент сибиреязвенных антигенов // Бюллетень №7 от 10.03.2002 г.
17.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Патент РФ на изобретение № 2180916 - штамм Bacillus anthracis КМ92 - продуцент сибиреязвенных антигенов // Бюллетень №9 от 27.03.2002 г.
18.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Патент РФ на изобретение № 2180917 - штамм Bacillus anthracis КМ90 – основа для генетического конструирования продуцентов сибиреязвенных антигенов // Бюллетень №9 от 27.03.2002 г.
19.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Патент РФ на изобретение № 2180350 - штамм Bacillus anthracis КМ91 – основа для генетического конструирования продуцентов сибиреязвенных антигенов // Бюллетень №7 от 10.03.2002 г.
20.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Патент РФ на изобретение № 2193597 – способ получения аспорогенного штамма Bacillus anthracis (варианты) // Бюллетень №33 от 27.11.2002 г.
21.Микшис Н. И., Болотникова М. Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Еремин С. А., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Получение аспорогенных штаммов Bacillus anthracis // Биотехнология. - 2003. - № 1. - С. 3-11.
22.Коннов Н.П., Волков Ю.П., Корсакова А.Ю., Данилова Т.В., Микшис Н.И., Мантуров А.О., Кузнецов О.С., Попов Ю.А., Киреев М.Н. Трансмиссионная электронная и сканирующая силовая микроскопия белков S-слоя сибиреязвенного микроба // Проблемы особо опасных инфекций. - 2004. - Вып. 2(88). - С. 34-36.
23.Корсакова А.Ю., Микшис Н.И., Попов Ю.А., Коннов Н.П., Киреев М.Н., Подборонова Н. В., Полунина Т.А. Выделение белков S-слоя сибиреязвенного микроба // Проблемы особо опасных инфекций. - 2004. - Вып. 1 (87). - С. 48 - 50.
24.Корсакова А.Ю., Микшис Н.И., Попов Ю.А. Характеристика белков S-слоя возбудителя сибирской язвы // Молодые ученые в медицине: Материалы IX Всероссийской научно-практической конференции. - Казань, 2004. - С. 130.
25.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Шулепов Д.В., Новикова Л.В., Болотникова М.Ф., Киреев М.Н. Генетическое конструирование продуцентов протективного антигена сибиреязвенного микроба // Медицинская микробиология – XXI век: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Саратов, 2004. - С. 156 - 157.
26.Корсакова А.Ю., Микшис Н.И., Попов Ю.А., Коннов Н.П. Иммуноэлектронная микроскопия для характеристики белков S-слоя Bacillus anthracis // Материалы ХХ Российской конференции по электронной микроскопии. – Черноголовка, 2004. - С. 238.
27.Корсакова А.Ю., Микшис Н.И., Попов Ю.А., Коннов Н.П. Электронно-микроскопическое исследование белков S-слоя сибиреязвенного микроба // Материалы ХХ Российской конференции по электронной микроскопии. – Черноголовка, 2004. - С. 239.
28.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Новикова Л.В., Попов Ю.А. Клонирование pag гена в протеазо-дефицитных бациллярных штаммах // Молекулярная медицина и биобезопасность: Материалы 1 Международной конференции.- Москва, 2004. - С. 131 -133.
29.Микшис Н.И., Корсакова А.Ю., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А. Иммуногенность белков S-слоя Bacillus anthracis // Молекулярная медицина и биобезопасность: Материалы 1 Международной конференции. – Москва, 2004. - С. 130-131.
30.Микшис Н.И., Корсакова А.Ю., Болотникова М.Ф., Попов Ю.А., Коннов Н.П., Киреев М.Н., Дроздов И.Г. Продукция белков S-слоя штаммами Bacillus anthracis // Биотехнология. - 2004. - № 5. - С. 22-32.
31.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Дроздов И.Г. Оценка иммунологической эффективности рекомбинантных штаммов с клонированным геном pag // Санитарная охрана территорий государств-участников СНГ: проблемы биологической безопасности и противодействия биологическому терроризму в современных условиях: Материалы VI Межгосударственной научно-практической конференции. - Волгоград, 2005. - С. 164-166.
32.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Дроздов И.Г., Щуковская Т.Н., Фирстова В.В., Клюева С.Н. Иммунологическая эффективность генетически сконструированных бациллярных штаммов, продуцирующих протективный антиген сибиреязвенного микроба // Проблемы особо опасных инфекций. – 2005. - Вып. 2(90). - С. 58 -59.
33.Попов Ю.А., Микшис Н.И., Корсакова А. Ю., Кудрявцева О.М., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Шулепов Д.В., Киреев М.Н., Коннов Н.П., Щуковская Т.Н., Фирстова В.В., Брандзишевский Ю.В., Полунина Т.А. Конструирование рекомбинантных штаммов Bacillus anthracis для создания нового поколения высокоэффективных сибиреязвенных вакцин // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. - Саратов, 2005. - С. 41.
34.Шулепов Д.В., Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Киреев М.Н., Попов Ю.А. Выделение и очистка протективного антигена из рекомбинантного штамма Bacillus anthracis // Окружающая среда и здоровье: Окружающая среда и здоровье: Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. - Суздаль, 2005 г. - С. 212-213.
35.Кудрявцева О.М., Микшис Н.И., Новикова Л.В., Болотникова М.Ф., Попов Ю.А. Генетическое конструирование продуцентов протективного антигена сибиреязвенного микроба // Окружающая среда и здоровье: Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. - Суздаль, 2005 г. - С. 164-167.
36.Микшис Н.И., Шулепов Д.В., Кудрявцева О.М., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Дроздов И.Г. Сравнение уровней продукции протективного антигена вакцинным и рекомбинантными штаммами Bacillus anthracis // Санитарная охрана территорий государств-участников СНГ: проблемы биологической безопасности и противодействия биологическому терроризму в современных условиях: Материалы VI Межгосударственной научно-практической конференции. - Волгоград, 2005. - С. 166-168.
37.Попов Ю.А., Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Корсакова А.Ю., Шулепов Д.В., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Щуковская Т.Н., Киреев М.Н., Брандзишевский Ю.В., Коннов Н.П. Конструирование рекомбинантных штаммов Bacillus anthracis для создания нового поколения высокоэффективных сибиреязвенных вакцин // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. – Саратов, 2006. - С. 51.
38.Кудрявцева О.М., Микшис Н.И., Новикова Л.В, Болотникова М.Ф., Шулепов Д.В., Попов Ю.А. Селекция стабильных и эффективных рекомбинантных продуцентов протективного антигена Bacillus anthracis // Проблемы особо опасных инфекций. - 2006. - Вып. 1 (91). - С. 38-41.
39.Микшис Н.И., Корсакова А.Ю., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А. Роль компонентов S-слоя в иммуногенности возбудителя сибирской язвы // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - № 1. - С. 29 -32.
40.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Шулепов Д.В., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А. Экспрессия гена синтеза протективного антигена сибиреязвенного микроба в рекомбинантных бациллярных штаммах // В сб. «Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов». - Москва, 2007. - Т. 1. - С. 84.
41.Микшис Н.И., Шулепов Д.В., Кудрявцева О.М., Болотникова М.Ф., Новикова Л.В., Попов Ю.А. Конструирование рекомбинантного аспорогенного штамма-продуцента протективного антигена сибиреязвенного микроба // В сб. «Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов». - Москва, 2007. - Т. 1. - С. 83-84.
42.Попов Ю.А., Микшис Н.И. Перспективы создания новых вакцинных препаратов для профилактики сибирской язвы // В сб. «Материалы IX съезда всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов». - Москва, 2007. - Т. 1. - С. 91-92.
43.Щуковская Т.Н., Фирстова В.В., Кравцов А.Л., Клюева С.Н., Попов Ю.А., Микшис Н.И. Оценка приобретенного иммунитета против сибирской язвы по степени повреждения лейкоцитов крови in vitro анатоксином // Проблемы особо опасных инфекций. - 2007. - Вып. 1 (97). - С. 81-85.
44.Шулепов Д.В., Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Попов Ю.А., Киреев М.Н. Получение высокоочищенного препарата протективного антигена из рекомбинантного аспорогенного штамма Bacillus anthracis // Международные медико-санитарные правила и реализация глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями в государствах-участниках СНГ: Материалы Межгосударственной научно-практической конференции. - Саратов, 2007. - С. 320-321.
45.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Шулепов Д.В., Попов Ю.А. Комплекс методических подходов к определению протективного антигена сибиреязвенного микроба // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. – Саратов, 2007. - С. 16.
46.Микшис Н.И., Кудрявцева О.М., Болотникова М.Ф., Шулепов Д.В., Новикова Л.В., Попов Ю.А., Щуковская Т.Н., Дроздов И.Г., Кутырев В.В. Иммуногенность рекомбинантных бациллярных штаммов с клонированным геном синтеза протективного антигена Bacillus anthracis // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2007. - № 3. - С. 15-21.
47.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Кудрявцева О.М. Патент РФ на изобретение № 2321628 – рекомбинантный штамм B. anthracis СТИТПА-1 (pUB110PA-1) - продуцент протективного антигена сибиреязвенного микроба // Бюллетень №10 от 10.04.2008 г.
48.Микшис Н.И., Попов Ю.А., Шулепов Д.В. Патент РФ на изобретение № 2321629 – аспорогенный рекомбинантный штамм B. anthracis 55DТПА-1 Spo- (pUB110PA-1) - продуцент протективного антигена сибиреязвенного микроба // Бюллетень №10 от 10.04.2008 г.