1. Популяция ряда природных штаммов V. cholerae эльтор и классического биоваров содержит два типа клонов, различающихся по морфологии колоний (прозрачные и мутные), продукции холерного токсина, растворимой гемагглютинин/протеазы, гемолизина, а также подвижности. Изменение морфологии колоний изогенных вариантов V. cholerae обоих биоваров связано с продукцией клетками экзополисахаридного слоя. Продуцирующие экзополисахарид холерные вибрионы эльтор биовара (EPS++) отличаются от изогенных (EPS+) вариантов меньшей подвижностью, повышенным уровнем биосинтеза холерного токсина, но сниженной продукцией растворимой гемагглютинин/протеазы. Для классических холерных вибрионов характерна обратная связь между экспрессией названных факторов вирулентности.
2. Присутствующий на поверхности клеток модельного штамма V. cholerae Дакка 35 классического биовара экзополисахаридный слой содержит рамнозу, глюкозу, галактозу и гексозамин. Экзополисахарид повышает устойчивость клеток к действию осмотического и оксидативного стресса.
3. Два фенотипически разных варианта модельного штамма V. cholerae Дакка 35 имеют разные протеомы. Среди 841 выявленного белка идентифицировано 57 белков с повышенным или пониженным содержанием в клетках. В клетках EPS++Тох+Нар++Mot++ репрессируется синтез 26 белков и индуцируется синтез 31. Для клеток EPS+Тох++Нар+Mot+ характерна обратная картина. Индукция в клетках EPS++Тох+Нар++Mot++ ряда мембранных и цитоплазматических белков с защитной функцией указывает на их повышенную резистентность к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды.
4. Щелочная (рН 9,0) реакция среды является сигналом внешней среды, вызывающим координированное переключение экспрессии генов экзополисахарида, холерного токсина, растворимой гемагглютинин/протеазы и подвижности. Переключение активности этих генов приводит к изменению вирулентности популяции и её резистентности к действию неблагоприятных факторов окружающей среды.
5. Геном рекомбинантной плазмиды рСТ105::mini-kan, несущей клонированные гены двух профагов вирулентности CTX и RS1, при введении его в клетки V. cholerae cholerae, согласно данным сравнительного протеомного анализа, изменяет экспрессию различных хромосомных генов, включая гены, кодирующие белки, являющиеся важными факторами патогенности и иммуногенности (ТСР и OmpU), и участвующими в энергетическом обмене, процессах метаболизма, цитокинезиса, транспорта, входящих в состав внешней мембраны.
6. Получены содержащие плазмиду и бесплазмидные штаммы V. cholerae классического биовара с высоким уровнем продукции одновременно трех ключевых протективных антигенов – холерного токсина, токсин-корегулируемых пилей адгезии и О1 антигена. Определены оптимальные параметры их выращивания для получения протективных антигенов в полупроизводственных условиях.
7. Создана экспериментальная многокомпонентная иммунодиагностическая тест-система, состоящая из 4-х очищенных протективных антигенов холерного вибриона (холерный токсин, токсин-корегулируемые пили адгезии, О1 антиген Инаба и Огава) и 4-х поликлональных антисывороток к ним. Указанная тест-система перспективна при оценки экспрессии основных генов патогенности у природных штаммов V. cholerae О1 серогруппы.
2.Чеховская Г. В. Новый высокотоксигенный штамм Vibrio cholerae Дакка35: морфология, продукция холерного токсина и белковый спектр / Г. В. Чеховская, С. П. Заднова, Л. Ф. Ливанова, Ю. В. Лазовский, Н. И. Смирнова // Centre for Control and Research of natural infectious diseases. Scientific Journal. – Ulaanbaatar, 1999. – N 7. – P. 282–283.
3.Konnov N. P. Comparative microscopy study of Vibrio cholera flagella / N. P. Konnov, V. B. Baibyrin, S. P. Zadnova, Y. P. Volkov // International Symposium. Biomedical Optic, Spie Proceedings. – San Jose, USA, 1999. – Vol. 3607. – P - 25. – S. 30–31.
4.Топорков А. В. Штаммы холерного вибриона с повышенной продукцией токсин-корегулируемых пилей адгезии: выявление и фенотипический анализ / А. В. Топорков, С. П. Заднова, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2000. – Вып. 80. – С .88–93.
5.Топорков А. В. ToxR-регулируемые гены и их экспрессия в штаммах Vibrio cholerae О1 (рСТ105::mini-kan) / А. В. Топорков, С. П. Заднова, Г. А. Ерошенко, Н. И. Смирнова // Холера и патогенные для человека вибрионы. Информация проблемной комиссии (46.04) межведомственного научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации (46.00). – Ростов-на-Дону, 2000. – Вып. 13. – С. 59–61.
6.Смирнова Н. И. Молекулярно- генетические особенности штаммов Vibrio cholerae classica, вызвавших эпидемию азиатской холеры в России в 1942 году / Н. И. Смирнова, Н. Б. Челдышова, С. П. Заднова, В. В. Кутырев // Молекул. генетика, микробиол. и вирусол. – 2001. – № 4. – С. 12–16.
7.Заднова С. П. Получение и фенотипический анализ штаммов холерного вибриона с повышенной продукцией основных протективных антигенов / С. П. Заднова, А. В. Топорков, Н. И. Смирнова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. – 2001. – № 2. – C. 3–6.
8.Заднова С. П. Получение и изучение антител против токсин-корегулируемых пилей адгезии холерного вибриона О1 серогруппы / С. П. Заднова, А. В. Топорков, О. В. Новикова, Н. П. Коннов, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2001. – Вып. 1(81). – С. 131–136.
9.Заднова С. П. Изучение продукции токсин-корегулируемых пилей адгезии у штаммов холерного вибриона классического биовара / С. П. Заднова, А. В. Топорков, О. В. Новикова, Н. П. Коннов, Н. И. Смирнова // Карантинные и зоонозные инфекции в Казахстане. Сб. тез. Международной научно-практической конференции. – Алматы, 2001. – Вып. 3. – С. 143–147.
10.Заднова С. П. Продукция токсин-корегулируемых пилей адгезии природными штаммами холерного вибриона / С. П. Заднова, А. В. Топорков, Н. Б. Челдышова, Н. И. Смирнова // Холера и патогенные для человека вибрионы. Материалы проблемной комиссии межведомственного научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. – Ростов-на-Дону, 2001. – Вып. 14. – С. 36–38.
11.Заднова С. П. Конструирование штаммов-суперпродуцентов токсин-корегулируемых пилей адгезии – основного фактора колонизации холерного вибриона / С. П. Заднова, А. В. Топорков, Н. Б. Челдышова, Н. П. Коннов, Н. И. Смирнова // Биотехнология. – 2002. – № 2. – С. 3–11.
12.Коннов Н. П. Изучение токсин-корегулируемых пилей адгезии холерного вибриона методом иммуноэлектронной микроскопии / Н. П. Коннов, С. П. Заднова, О. В. Новикова, А. В. Топорков, Н. И. Смирнова // ЭМ’2002. Тез. докл. ХIХ Российской конференции по электронной микроскопии. – Черноголовка, 2002. – C. 229.
13.Заднова С. П. Получение и использование антител на токсин-корегулируемые пили адгезии холерного вибриона / С. П. Заднова, А. В. Топорков, О. В. Новикова, Н. И. Смирнова // Биотехнология. – 2003. – № 1. – C. 79–84.
14.Топорков А. В. Генетический контроль регуляции экспрессии основных генов патогенности у возбудителя холеры / А. В. Топорков, С. П. Заднова, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2003. – Вып. 85. – С. 113–121.
15.Заднова С. П. Изучение роста штаммов холерного вибриона - продуцентов протективных антигенов в условиях глубинного культивирования и выделение белка токсин-корегулируемых пилей адгезии / С. П. Заднова, С. А. Еремин, Н. Г. Авдеева, О. А. Волох // Холера. Материалы Российской научно-практической конференции. – Ростов-на-Дону, 2003. – С. 236–238.
16.Заднова С. П. И. Колониальные вариации штамма Vibrio cholerae Дакка 35 Огава / С. П. Заднова, А. В. Топорков, Т. Л. Захарова, Н. П. Коннов, Н. И. Смирнова // Холера. Материалы Российской научно-практической конференции. – Ростов-на-Дону, 2003. – С. 140–143.
17.Smirnova N. I. Molecular-genetic peculiarities of classical biotype Vibrio cholerae, the etiological agent of the last outbreak Asiatic cholera in Russia / N. I. Smirnova, N. B. Cheldyshova, S. P. Zadnova, V. V. Kutyrev // Microb. Pathog. – 2004. – Vol. 36, N 3. – Р. 131–136.
18.Заднова С. П. Изучение динамики роста штаммов Vibrio cholerae-продуцентов протективных антигенов в условиях глубинного культивирования и выделение токсин-корегулируемых пилей адгезии / С. П. Заднова, С. А. Еремин, Н. Г. Авдеева, О. А. Волох // Биотехнология. – 2004. – № 3. – С. 43–48.
19.Заднова С. П. Фенотипический анализ штамма Vibrio сholerae Дакка 35 Огава, имеющего гетерогенную популяцию / С. П. Заднова, А. В. Топорков, Н. Д. Исаев // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. – 2004. – № 3. – С. 86–88.
20.Заднова С. П. Функциональная роль ToxR-регулируемых белков Vibrio cholerae / С. П. Заднова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2004. – Вып. 1(87). – С. 9–13.
21.Заднова С. П. Биохимический анализ двух фенотипически различных клонов штамма Vibrio cholerae Дакка 35 О1 / С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, Н. П. Коннов, Т. Л. Захарова, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2004. – Вып. 1(87). – С. 42–45.
22.Заднова С. П. Сравнительное изучение белкового состава у токсигенных и нетоксигенных клонов штамма Vibrio cholerae Дакка35 / С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, Н. И. Смирнова // Молекулярная медицина и биобезопасность. Сб. тез. I Международной конференции. – М., 2004. – С. 80–81.
23.Заднова С. П. Вариабельность биохимических и генетических свойств штамма Vibrio cholerae Дакка 35 / С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, Н. И. Смирнова // Генетика в ХХI веке: современное состояние и перспективы развития. Сб. тез. III съезда Вавиловского общества генетиков и селекционеров России. – М., 2004. – Т.1. – С. 381.
24.Топорков А. В. Повышение продукции основных протективных антигенов Vibrio cholerae О1 с помощью рекомбинантной плазмиды с клонированными генами холерного токсина / А. В. Топорков, С. П. Заднова, Н. И. Смирнова // Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины. Сб. тез. III конференции молодых ученых с международным участием. – М., 2004. – С. 160–161.
25.Смирнова Н. И. Влияние рекомбинантной плазмиды, несущей клонированные гены холерных профагов СТХ и RS1, на экспрессию генов вирулентности и иммуногенности у возбудителя холеры / Н. И. Смирнова, С. П. Заднова, А. В. Топорков // Молекул. генетика, микробиол. и вирусол. – 2005. – № 3. – С. 3–8.
26.Топорков А. В. Сравнительный анализ продукции протективных антигенов у рекомбинантных и производственных штаммов Vibrio cholerae классического биовара / А. В. Топорков, С. П. Заднова, Н. И. Смирнова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. – 2005. – № 1. – С. 53–57.
27.Исаев Н. Д. Популяционная неоднородность природных штаммов Vibrio cholerae классического биовара: координированное изменение морфологии колоний, подвижности, токсигенности и ферментативных свойств / Н. Д. Исаев, Ю. В. Лозовский, С. П. Заднова, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2005. – Вып. 1(89). – С. 43–46.
28.Заднова С. П. Механизмы секреции грамотрицательных бактерий / С. П. Заднова, Ю. В. Лозовский // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2005. – Вып. 2(90). – С. 11–16.
29.Смирнова Н. И. Конструирование штаммов-продуцентов основных протективных антигенов холерного вибриона с помощью изменения экспрессии глобального регуляторного гена toxR / Н. И. Смирнова, С. П. Заднова, А. В. Топорков, В. В. Кутырев // Биотехнология: состояние и перспективы развития. Материалы III Международного конгресса. – М., 2005. – Ч.1. – С. 82.
30.Кузнецов О. С. Изучение морфологии колоний Vibrio cholerae Дакка 35 методами растровой и трансмиссионной электронной микроскопии / О. С. Кузнецов, С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, Н. И. Смирнова, Н. П. Коннов // ХIV Российский симпозиум по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел. Тез. докл. – Черноголовка, 2005. – C. 261.
31.Заднова С. П. Экзополисахаридный слой холерных вибрионов классического биовара: обнаружение, биохимический анализ и функциональная значимость / С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, Н. И. Смирнова // Холера и патогенные для человека вибрионы. Сборник материалов проблемной комиссии Научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. – Ростов-на-Дону, 2005. – Вып. 18. – С. 92–94.
32.Smirnova N. I. Construction of strains producing the main protective antigens of Vibrio cholerae based on altered expression of the global regulatory gene toxR / N. I. Smirnova, S. P. Zadnova, A. V. Toporkov, V. V. Kutyrev // New Research on Biotechnology and Medicine / Edit. A.M. Egorov, G.E. Zaikov. New York, 2006. – P. 177–188.
33.Заднова С. П. Протеомный анализ двух изогенных вариантов Vibrio cholerae классического биовара с альтернативной экспрессией генов вирулентности / С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, К. Б. Кутейкин-Тепляков, О. В. Тихонова, И. Ю. Торопыгин, А. И. Арчаков, Н. И. Смирнова // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. – 2006. - № 3. – С. 11–16.
34.Исаев Н. Д. Влияние условий среды на координированное переключение генов патогенности и персистенции у холерного вибриона / Н. Д. Исаев, С. П. Заднова, Н. И. Смирнова // Холера и патогенные для человека вибрионы. Сборник материалов проблемной комиссии Научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. – Ростов-на-Дону, 2006. – Вып. 19. – С. 69–71.
35.Заднова С. П. Выделение токсин-корегулируемых пилей адгезии и белка внешней мембраны OmpU из штамма холерного вибриона классического биовара / С. П. Заднова, С. А. Еремин, О. А. Волох, Н. И. Смирнова // Чрезвычайные ситуации международного значения в общественном здравоохранении в решениях Санкт-Петербургского саммита «Группы восьми» и санитарная охрана территорий государств – участников Содружества Независимых Государств. Материалы VII Межгосударственной научно-практической конференции. – Оболенск, 2006. – С. 105–106.
36.Заднова С. П. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях / С. П. Заднова, О. А. Волох, И. М. Крепостнова, Е. Ю. Щелканова, Л. Ф. Ливанова, Т. Л. Захарова, И. А. Шепелев, С. А. Еремин, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2007. – Вып. 1(95) – С. 51–55.
37.Zadnova S. P. Studying Vibrio cholerae isogenic variants of classical biovar by means of proteomic analysis / S. P. Zadnova, N. D. Isayev, N. I. Smirnova // Эрдэм Шинжилгээний Бутээл (Natural infectious and emerging and reemerging diseases). Scientific Journal. – Улаанбаатар, 2007. – № 15. – С. 253–258.
38.Заднова С. П. Изменение свойств штаммов холерного вибриона классического биовара под действием факторов внешней среды и мобильных генетических элементов / С. П. Заднова, Н. Д. Исаев, Ю. В. Лозовский, Н. И. Смирнова // Холера и патогенные для человека вибрионы. Сборник материалов проблемной комиссии Координационного научного совета по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации. – Ростов-на-Дону, 2007. – Вып. 20. – С. 102–105.
39.Захарова Т. Л. Создание многокомпонентной диагностической иммуноферментной тест-системы для оценки экспрессии основных генов вирулентности у холерных вибрионов / Т. Л. Захарова, С. П. Заднова, Л. Ф. Ливанова, И. М. Крепостнова, М. Н. Киреев, Н. И. Смирнова // Биотехнология. – 2008. – № 1. – С. 88–96.
40.Волох О. А. Изучение физиологических процессов, происходящих в популяции штаммов холерного вибриона продуцентов протективных антигенов, в процессе производственного культивирования / О. А. Волох, И. А. Шепелёв, С. П. Заднова, И. М. Крепостнова, С. А. Еремин // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2008. – Вып. 1(95). – С. 52-55.
41.Захарова Т. Л. Конструирование рекомбинантных штаммов для одновременного получения нескольких очищенных основных протективных антигенов холерного вибриона / Т. Л. Захарова, С. П. Заднова, Л. Ф. Ливанова, М. Н. Киреев, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2009. – Вып. 2(100). – C. 68-71.
42.Заднова С. П. Выявление в природных популяциях холерного вибриона клонов с различной экспрессией факторов вирулентности и персистенции и их фенотипический анализ / С. П. Заднова, Л. Ф. Ливанова, Ю. В. Лозовский, Н. И. Смирнова // Пробл. особо опасных инф. – Саратов, 2009. – Вып. 3(101). - (принята в печать).
Патенты Российской Федерации на изобретения.
43.Штамм бактерий Vibrio cholerae 2414 классического биовара серовара Огава – продуцент холерного токсина и токсин-корегулируемых пилей адгезии: пат RU 2169187 C1 / Смирнова Н. И., Заднова С. П., Топорков А. В.; заявитель и патентообладатель ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб». - № 2169187 C1; заявл. 26.04.2000; опубл. 20.06.2001, Бюл. № 17. – 6 с.
44.Штамм бактерий Vibrio cholerae KM200-продуцент холерного токсина и токсин-корегулируемых пилей адгезии: пат. RU 2193598 C1 / Смирнова Н. И., Заднова С. П., Топорков А. В., Челдышова Н. Б.; заявитель и патентообладатель ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб». - № 2193598, заявл. 26.07.2001, опубл. 27.11.2002. Бюл. № 33. – 6 с.
45.Штамм бактерий Vibrio cholerae KM206 классического биовара серовара Огава - продуцент протективных антигенов: пат. RU 2222594 C1 / Топорков А. В., Заднова С. П., Смирнова Н. И., Кутырев В. В.; заявитель и патентообладатель ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб». - № 2222594, заявл. 15.07.2002, опубл. 27.01.2004, Бюл. № 3. – 8 с.
46.Штамм бактерий Vibrio cholerae KM207 классического биовара серовара Инаба - продуцент протективных антигенов: пат. RU 2222595 C1 / Заднова С. П., Топорков А. В., Смирнова Н. И., Кутырев В. В.; заявитель и патентообладатель ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб». - № 2222595, заявл. 15.07.2002; опубл. 27.01.2004, Бюл. № 3. – 10 с.
47.Способ выделения белков токсин-корегулируемых пилей адгезии и OmpU холерного вибриона классического биовара: пат. RU 2324740 C2 / Заднова С. П., Еремин С. А., Авдеева Н. Г., Волох О. А., Самохвалова Ю. И., Смирнова Н. И.; заявитель и патентообладатель ФГУЗ РосНИПЧИ «Микроб». - № 2324740; заявл. 11.07.2006; опубл. 20.05.2008, Бюл. № 14. – 7 с.: ил.