- Выявлена последовательность Tyr-Pro, встречающаяся у большинства (63%) атипичных ОП и продемонстрировано, что именно она является минимально необходимой для проявления анальгетической активности. Впервые показано, что дипептид Tyr-Pro в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг при системном введении проявляет анальгетическую активность в тестах соматической и висцеральной боли при активации ноцицепторов химическим, термическим и механическим стимулами, и обладает противовоспалительным действием. Анальгетическое действие дипептида реализуется через налоксон-чувствительные механизмы; Tyr-Pro имеет низкое сродство к периферическим d-ОР, и не взаимодействует с периферическими µ-ОР. Tyr-Pro в дозах 1 - 800 мг/кг не влияет на частоту дыхания и не вызывает гибели мышей в течение последующих 24 часов. Установлено, что фармакологическая активность атипичных ОП не зависит от положения последовательности Tyr-Pro в молекуле и модификация C- и N-конца последовательности -Tyr-Pro- природными аминокислотами сохраняет анальгетическую активность полученных пептидов, что открывает возможности конструирования новых пептидов, стойких к протеолизу и обладающих анальгетическим действием.
- Показано, что стереохимическая модификация или дегидрирование остатка пролина в молекуле атипичного ОП дерморфина (Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-Pro-Ser-NH2) не изменяет анальгетическую активность при химическом и механическом раздражении и уменьшает противовоспалительное действие. Наряду с этим, дегидрирование остатка пролина в молекуле дерморфина приводит к ослаблению противовоспалительного и анальгетического действия при механическом раздражении ноцицепторов, но вызывает появление анксиолитической и потерю противосудорожной активности.
- При изучении 22 оригинальных пептидов выявлена новая группа соединений, обладающих анальгетическим действием, общей формулы А-Tyr-Pro(D-Pro, ΔPro, D-ΔPro, Hyp)-В-X, где А, В - природные аминокислоты, а Х - метильная или амидная группировка. Установлено, что анальгетическая активность этих пептидов не зависит от взаимодействия с периферическими m- и d-ОР подвздошной кишки морской свинки (ПКМС) и семявыносящего протока мыши (СПМ), что предполагает низкий риск развития лекарственной зависимости. Среди пептидов этой группы отобраны Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2, которые обладают наиболее высокой анальгетической активностью. Установлено, что в смеси стереоизомеров Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 (1:1), получаемой в результате амидирования Tyr-Pro-L-Ser-OMe, анальгетической активностью обладает только D-стереоизомер (Tyr-Pro-D-Ser-NH2).
- Впервые показано, что Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 в дозах 0.1 - 10.0 мг/кг при системном введении проявляют анальгетическое действие в тестах по оценке болевой чувствительности, основанных на активации ноцицепторов термическими, химическими или механическим стимулами. Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 активен на модели нейропатической боли; Tyr-D-Pro-Ser-NH2 оказывает прямое действие на первичные афференты ноцицептивного флексорного рефлекса. Анальгетическое действие Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 уменьшается при холодной (4°С) и жаркой (31-32°С) температуре окружающей среды.
- Показано участие опиоидергической системы в анальгетическом действии Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2: анальгетическая активность ослабляется неселективным антагонистом центральных ОР налоксоном и периферических ОР - налоксоном метиодидом. Установлено, что Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2 взаимодействуют с «высокоаффинными» центрами связывания (1.5 - 3 нМ) дерморфина и не взаимодействуют с «низкоафинными» (> 5 нМ). Tyr-Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-D-Pro-Ser-NH2, в отличие от дерморфина и морфина, проявляют слабое сродство (IC50 3.3*10-5 моль и 4.5*10-5 моль, соответственно) к периферическим m-ОР ПКМС и не обладают сродством (IC50 6.5*10-4 моль и 5.3*10-4 моль, соответственно) к периферическим d-ОР СПМ.
- Установлено, что Tyr-[3H]Pro-[D,L]-Ser-NH2 и Tyr-[3H]D-Pro-Ser-NH2 наиболее интенсивно распределяются в сильно васкуляризированных органах выделения (печень, почки) и меньше - в слабоваскуляризированных (мозг, легкие, сердце). Оба соединения выводятся из организма (t1/2el из крови = 53.6 и 57.8 мин, MRT из крови = 43.2 и 46.1 мин, соответственно), а их протеолиз осуществляется ферментами крови, сердца, легких и мозга. В качестве основного меченного метаболита обнаруживаются пролин и D-пролин, соответственно.
2.Гузеватых, Л.С. Изучение анальгетической активности аналогов эндогенного пептида дерморфина [Текст] / Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, А.Б. Усенко, Т.Г. Емельянова, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Международная научная конференция «Новые лекарственные средства: синтез, технология, фармакология, клиника». Минск, 14-16 ноября 2001. – Минск, 2001. – С.58.
3.Емельянова, Т.Г. Влияние аналогов дерморфина на терморегуляцию крыс в различных температурных режимах [Текст] / Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, А.П. Бонарцев, А.А. Каменский, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. – 2002. – Т.3. – С. 348-354.
4.Гузеватых, Л.С. Влияние структурных изменений Pro6 в молекуле дерморфина на анальгетическую активность [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. – 2002. – Т. 4. – С. 472-476.
5.Емельянова, Т.Г. Структурно-конформационные особенности дерморфинов и их роль в регуляции температурного гомеостаза [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, А.Б. Усенко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы докладов Всероссийского симпозиума «Механизмы терморегуляции и биоэнергетики: взаимодействие функциональных систем»; Иваново, 1-5 октября 2002. – Иваново, 2002. – С. 22.
6.Емельянова, Т.Г. Дерморфины – природные опиоидные пептиды. Связь структуры с функцией [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, А.Б. Усенко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы научных докладов III Съезда биохимического общества; Санкт-Петербург, 2002. – С.-Пб., 2002. – С. 538.
7.Emel’yanova, T.G. In vitro and in vivo opioid activity of [D-Pro6]dermorphin, novel analogue to dermorphin [Текст] / T.G. Emel’yanova, A.B. Usenko, M.G. Uranova, A.A. Kamensky, L.S. Guzevatykh, L.A. Andreeva, L.A. Alfeeva, N.F. Myasoedov, E. Gianini, G. Improta, M. Broccardo // Peptides. – 2003. – V.24, №3. – Р. 419-428.
8.Гузеватых, Л.С. Анальгетическая активность аналогов дерморфина со стереохимическими модификациями пролина в шестом положении [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы II съезда Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии»; Москва, 2003, ч. 2. – М., 2003. – С. 228.
9.Emel’yanova, T.G. Structure-activity relationships of Dermorphines [Текст] / T.G. Emel’yanova, A.B. Usenko, L.S. Guzevatykh, L.A. Andreeva, L.Y. Alfeeva, N.F. Myasoedov // Tenth German-Russian Peptide Symposium, Turingia, Germany, 2-5 October 2003. – Germany, Turingia, 2003. – P. 23.
10.Емельянова, Т.Г. Структурно-функциональные исследования дерморфинов [Текст] / Т.Г. Емельянова, А.Б. Усенко, Л.С. Гузеватых, Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева; Н.Ф. Мясоедов // Тезисы докладов Российского симпозиума по химии и биологии пептидов; Москва, 17 ноября 2003. – М., 2003. – С. 10.
11.Валуйских, Д.В. Роль шестой аминокислоты молекулы дерморфина в проявлении анальгетической активности пептида [Текст] / Д.В. Валуйских, Л.С. Гузеватых, Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева, Т.Г. Емельянова, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы стендовых сообщений Российского симпозиума по химии и биологии пептидов; Москва, 17 ноября 2003. – М., 2003. – С. 66.
12.Емельянова, Т.Г. «Терморегуляторная активность фрагментов дерморфина» [Текст] / Т.Г. Емельянова, Н.Н. Горячева, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. – 2004. – Т.5. – С. 570-576.
13.Емельянова, Т.Г. «Изучение терморегуляторной активности фрагмента природного предшественника дерморфина – Arg-дерморфина и его аналогов» [Текст] / Т.Г. Емельянова, Н.Н. Горячева, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известия АН, серия биологическая. – 2005. – Т.1. – С. 47-54.
14.Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дерморфина и его пролиновых аналогов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Д.В. Валуйских, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, С.Б. Середенин, Н.Ф. Мясоедов // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2005. – Т.68, №2. – С.8-10.
15.Гузеватых, Л.С. «Сравнительное изучение физической зависимости пролинового аналога дерморфина и морфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Д.В. Валуйских, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2005. – Т.68, №3. – С.16-19.
16.Guzevatykh, L.S. «The biological activity of the novel fragment of the natural precursor for the dermorphin – Arg-dermorphin and its analogues» [Текст] / L.S. Guzevatykh // Proceeding of 8th ECNP Regional Meeting, Moscow – Russia, April 14-16, 2005. – Eur. Neuropsychopharmacology. – 2005. – V.15 (Suppl. 2). - S268.
17.Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дерморфина и его аналогов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Тезисы докладов II Российского симпозиума по химии и биологии пептидов, Санкт-Петербург, 25-27 мая 2005. – С.-Пб., 2005. - С.39.
18.Емельянова, Т.Г «Влияние стереохимической модификации Pro6 в молекуле дерморфина на изменение сосудодвигательной активности» [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов, Т.А. Воронина // Тезисы докладов II Российского симпозиума по химии и биологии пептидов, Санкт-Петербург, 25-27 мая 2005. – С.-Пб., 2005. - С.56.
19.Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность пролиновых аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные вопросы острой и хронической боли» Самара, 28-30 июня 2005 // Патогенез. – 2005. – Т.1. – С.7-8.
20.Гузеватых, Л.С. «Физиологическая активность новых аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Материалы I съезда физиологов СНГ, Сочи, Дагомыс, 19-23 сентября 2005. – М., 2005. – С.59.
21.Алфеева, Л.Ю. Семейство пептидов, обладающее анальгетической активностью» [Текст] /Л.Ю. Алфеева, Л.А. Андреева, Т.А. Воронина, Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин / Патент РФ №2286169, приоритет от 18.04.2005 // Бюллетень "Изобретения. Полезные модели". – 2006. – №30. – С. 18.
22.Гузеватых, Л.С. «Фармакологическая активность аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Материалы IV международной научной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», Москва, Россия, 13-16 марта 2006. – М., 2006. – С.47.
23.Voronina, T. «Substances with analgesic activity among dermorphine analogues» [Текст] / T. Voronina, L. Guzevatykh, L. Andreeva, T. Emelyanova, S. Seredenin, N. Myasoedov // 15th World Congress of Pharmacology, Beijing, China, July 2-7, 2006 – Beijing, China, 2006. – P.45.
24.Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая и нейротропная активность новых аналогов дерморфина» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Второй международный междисциплинарный Конгресс «Нейронаука для медицины и психологии», Судак, Крым, Украина, июнь 10-21, 2006. – Судак, 2006. – С. 38.
25.Гузеватых, Л.С. «Новые аналоги дерморфина и их анальгетическая и нейротропная активность» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы XVIII симпозиума «Современная химическая физика» Туапсе, Россия, 22 сентября – 3 октября 2006. – М., 2006. – С.86.
26.Громовых, П.С. «Синтез меченных тритием фрагментов дерморфина и исследование кинетики распределения радиоактивности в органах крысы при их внутримышечной инъекции» [Текст] / П.С. Громовых, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, В.П. Шевченко, К.В. Шевченко, И.Ю. Нагаев, Н.Ф. Мясоедов, Т.А. Воронина // Радиохимия. – 2007. – Т.49, №1. – С. 93-96.
27.Гузеватых, Л.С. «Сравнительный анализ анальгетической активности дерморфина, [D-Pro6]-дерморфина и их С-концевых трипептидов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, П.С. Громовых, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин // Известие РАН, серия биологическая. – 2007. – №5. – С. 577-582.
28.Громовых, П.С. «Синтез, фармакокинетика и метаболизм С-концевого трипептида дерморфина и его диастереомера» [Текст] / П.С. Громовых, Л.С. Гузеватых, К.В. Шевченко, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, В.П. Шевченко, И.Ю. Нагаев, Т.А. Воронина, Н.Ф. Мясоедов // Биоорганическая химия. – 2007. – Т.33, №6. – С. 581-587.
29.Емельянова Т.Г. «Влияние N-концевых трипептидов бомбезина, литорина и их аналога на температуру тела и возможные реакции» [Текст] / Т.Г. Емельянова, И.В. Сосновская, Н.Н. Горячева, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Е.Б. Евстегнеева, В.П. Голубович // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2007. - Т. 144, № 8. – С. 174-176.
30.Емельянова, Т.Г. «Связь структуры дерморфинов с их терморегуляторной активностью» [Текст] / Т.Г. Емельянова, Л.С. Гузеватых, Л.А.Андреева, Л.Ю. Алфеева, Н.Ф. Мясоедов // Известие РАН, серия биологическая. – 2007. – №6. – С. 711-719.
31.Емельянова, Т.Г. «Зависимость анальгетической активности дерморфина, метэнкефалина и динорфина А от температуры окружающей среды» [Текст] / Т.Г. Емельянова, А.Б. Колотилова, Л.С. Гузеватых, Н.Ф. Мясоедов // Доклады Академии наук. – 2007. – Т.417, № 5. – С. 704-706.
32.Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дипептида Tyr-Pro» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы Российской научно-практической конференции с международным участием «Хронические болевые синдромы»; Новосибирск, 23-25 мая 2007. – Новосибирск, 2007. – С.51.
33.Громовых, П.С. «Использование меченого тритием Tyr-[3,4-3H]Pro-Ser-NH2 для изучения их рецепторного связывания с мембранной фракцией головного мозга крыс» [Текст] / П.С. Громовых, О.Ю. Соколов, Н.В. Кост, А.А. Зозуля, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, Л.С. Гузеватых, К.В. Шевченко, И.Ю. Нагаев, В.П. Шевченко // III Российский симпозиум «Белки и пептиды». Тезисы стендовых сообщений; Пущино, 16–21 сентября 2007 – Пущино, 2007. – С. 67.
34.Гузеватых, Л.С. «Короткие Tyr-Pro-содержащие пептиды – новый класс пептидов, обладающих анальгетической активностью» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // III Российский симпозиум “Белки и пептиды”; Пущино, 16–21 сентября 2007. - Пущино, 2007. - С. 48.
35.Сосновская, И.В. «Влияние пролиновых аналогов дерморфина на двигательную активность и ориентировочно-исследовательскую реакцию» [Текст] / И.В. Сосновская, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // III Российский симпозиум “Белки и пептиды”; Пущино, 16–21 сентября 2007. - Пущино, 2007. - С. 92.
36.Гузеватых, Л.С. «Аналоги дерморфина – новый класс анальгетических средств» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Л.А. Андреева, Т.Г. Емельянова, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. – 2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 1. - С. 1670.
37.Калинина, Т.С. «Сравнительное изучение дифференцировочных стимульных свойств анксиолитиков и нейролептиков» [Текст] / Т.С. Калинина, Т.А. Воронина, Л.С. Гузеватых, Е.В. Петрянина // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. – 2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 1. - С. 1715.
38.Каримова, О.Б. «Исследование влияния природного опиоидного пептида дерморфина и его С-концевого фрагмента на содержание нейротрансмиттерных аминокислот в структурах мозга крыс Wistar» [Текст] / О.Б. Каримова, П.М. Клодт, В.Б. Наркевич, Л.С. Гузеватых, В.С. Кудрин, А.И. Майский, Т.А. Воронина // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. – 2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 1. - С. 1719.
39.Сосновская, И.В. «Роль пролина в молекуле дерморфина в проявлении анальгетической активности пептида» [Текст] / И.В. Сосновская, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Л.А. Андреева, Т.Г. Емельянова, Н.Ф. Мясоедов, С.Б. Середенин // Материалы III Съезда фармакологов России. «Фармакология практическому здравоохранению». Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007 г. // Психофармакология и биологическая наркология. – 2007. - Т. 7 (спец. выпуск); ч. 2. - С. 1961.
40.Гузеватых, Л.С. «Анальгетическая активность дипептида TYR-PRO» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, С.Б. Середенин, Н.Ф. Мясоедов // Известие РАН, серия биологическая. – 2008. – №1. – С.1-7.
41.Громовых, П.С. «Использование меченного тритием дерморфина для исследования взаимодействия С-концевого аналога дерморфина Tyr-Pro-Ser-NH2 и его стереоизомера Tyr-D-Pro-Ser-NH2 с опиоидными рецепторами» [Текст] / П.С. Громовых, О.Ю. Соколов, Н.В. Кост, А.А. Зозуля, Л.С. Гузеватых, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, К.В. Шевченко, В.П.Шевченко, И.Ю. Нагаев, Мясоедов Н. Ф.. // Доклады Академии наук. – 2008. – Т. 419, № 2. – С. 276-278.
42.Гузеватых, Л.С. «Выявление функционально значимого дипептидного фрагмента в аминокислотных последовательностях атипичных опиоидных пептидов» [Текст] / Л.С. Гузеватых // Биоорганическая химия. – 2008. – Т.34, № 5. – С. 591-609.
43.Сосновская, И.В. «Влияние дерморфина и его пролиновых аналогов на двигательную активность, ориентировочно-исследовательскую реакцию, уровень тревожности и устойчивости к депрессии» [Текст] / И.В. Сосновская, Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Л.Ю. Алфеева, С.Б. Середенин, Н.Ф. Мясоедов // IV Международный Междисциплинарный Конгресс “Нейронаука для медицины и психологии”, 10-20 июня Судак, Крым, Украина, 2008 г. – М:ООО «МАКС Пресс», 2008. – С. 283.
44.Гузеватых, Л.С. «Поиск новых анальгетиков на основе общей последовательности атипичных опиоидных пептидов» [Текст] / Л.С. Гузеватых, Т.А. Воронина, Т.Г. Емельянова, Л.А. Андреева, Н.Ф. Мясоедов // Материалы IV Российского симпозиума «Белки и пептиды», Казань, 23-27 июня 2009. – Казань: Издательство «ФизтехПресс» КазНЦ РАН, 2009. – С. 20.