- Экспериментальная питательная среда на основе ферментативного гидролизата соевой муки, полученного с помощью растительного протеолитического фермента бромелаина, содержащая сниженное количество (с 5-10 % до 2 и 3 %) сыворотки, пригодна для культивирования перевиваемых линий клеток MDCK и Vero, являющихся субстратом для культуральных гриппозных вакцин.
- Использование растительных ферментов бромелаина и папаина в составе питательных сред на основе ферментативных гидролизатов сои и риса позволяет получать высокие инфекционные титры вирусов гриппа (9,0-9,5 lg ТЦД50/мл) для производства инактивированной и живой вакцин в перевиваемых линиях клеток MDCK и Vero. Максимальное накопление вакцинных штаммов вируса гриппа для живой и инактивированной гриппозной вакцины в клеточных линиях MDCK и Vero при использовании растительных препаратов (сред и ферментов) зависит от множественности инфекции, вида и концентрации протеазы, адаптации штаммов вируса к клеткам. Для живой гриппозной вакцины критическим является время сбора «урожая» вируса.
- Стабилизатор, содержащий 10 % сахарозы и 5 % соевого гидролизата, полученного с помощью бромелаина, обеспечивает сохранение инфекционной активности вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 (H5N2), выращенного в перевиваемой клеточной линии MDCK при использовании питательной среды на основе ферментативного гидролизата сои и в присутствии бромелаина, на стадии сублимационного высушивания и при хранении в течение 1 года.
- Усовершенствование технологии приготовления живой культуральной гриппозной вакцины субтипа A/H5N2 с использованием растительных препаратов включает (1) наработку клеток MDCK в роллерах в малосывороточной (2 %) среде на основе ферментативного гидролизата сои, полученного с использованием бромелаина; (2) накопление в присутствии 20 мкг/мл бромелаина холодоадаптированного вакцинного штамма вируса гриппа А/17/утка/Потсдам/86/92 (H5N2) в выращенных клетках; (3) введение в культуральную вируссодержащую жидкость стабилизатора, содержащего 10 % сахарозы и 5 % соевого гидролизата, полученного с помощью бромелаина; (4) сублимационное высушивание.
- Сухие культуральные (MDCK) вакцинные образцы, содержащие штамм вируса гриппа субтипа A/H5N2, полученные с использованием растительных препаратов, генетически стабильны и иммуногенны для мышей. При двукратной интраназальной иммунизации животных они индуцируют выработку системных и локальных антител не только к гомологичному вирусу, но и к высокопатогенным вариантам вируса гриппа птиц A/H5N1.
- Применение растительного иммуномодулятора Иммуномакс обеспечивает усиление иммунного ответа у мышей при иммунизации синтетическими пептидами из вариабельного и консервативного сайтов тяжелой цепи гемагглютинина вируса гриппа A/Aichi/2/68 (H3N2), без дополнительного введения адъюванта Фрейнда.
1.Мазуркова Н.А., Исаева Е.И., Подчерняева Р.Я. Пептидное картирование моноклональных антител к тяжелой цепи гемагглютинина вируса гриппа H3N2 // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2006. - № 4. – С. 19-23.
2.Онищенко Г.Г., Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Радаева И.Ф., Мартынец Л.Д., Сумкина Т.П., Ким И.И., Нечаева Е.А., Дроздов И.Г. Оптимизация технологии производства живой культуральной противогриппозной вакцины с использованием питательной среды на основе гидролизатов белков растительного происхождения // Биотехнология. - 2007. - № 3. - С. 31-37.
3.Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Радаева И.Ф., Нечаева Е.А., Дроздов И.Г. Использование растительной протеазы при разработке живой культуральной гриппозной вакцины // Биотехнология. – 2008. - № 3. – С. 63-69.
4.Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Сумкина Т.П., Колокольцова Т.Д., Скарнович М.О., Кабанов А.С., Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н. Сравнительный анализ репродукции штаммов вируса гриппа в перспективных для производства культуральных вакцин клеточных линиях при использовании питательной среды на основе гидролизата белков рисовой муки // Клеточные технологии в биологии и медицине. - 2008. - № 4. - С. 234-238.
5.Мазуркова Н.А., Рябчикова Е.И., Трошкова Г.П., Гетманова Т.Н., Сумкина Т.П., Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н. Изучение морфологических и пролиферативных характеристик клеток Vero и MDCK при культивировании в питательных средах на основе гидролизатов растительных белков // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2009. - № 2. – С. 117-120.
6.Данлыбаева Г.А., Мазуркова Н.А., Матюшина Р.О., Трошкова Г.П., Подчерняева Р.Я. Питательная среда на основе гидролизата рисовой муки для культивирования клеток и определение чувствительности к вирусам гриппа // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2009. - № 2. – С. 113-116.
7.Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Рябчикова Е.И., Терновой В.А., Трошкова Г.П. Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Руденко Л.Г. Репродукция холодоадаптированного вакцинного штамма вируса гриппа H5N2 в клеточных культурах MDCK и Vero при использовании растительных протеаз и питательных сред на основе гидролизатов рисовой и соевой муки // Биотехнология. - 2010. - № 1. - С. 68-76.
8.Мазуркова Н.А., Рындюк Н.Н., Шишкина Л.Н., Терновой В.А., Туманов Ю.В., Булычев Л.Е., Скарнович М.О., Кабанов А.С., Панченко С.Г., Алейников Р.П., Ильина Т.Н., Кузубов В.И., Мельников С.Я., Миронов А.Н., Коровкин С.А., Сергеев А.Н., Дроздов И.Г. Результаты клинических испытаний реактогенности, безопасности и иммуногенности гриппозной аллантоисной интраназальной живой вакцины «Ультрагривак» (тип A/H5N2) // Вестник РАМН. - 2010 - №. 3. - С. 15 - 20.
9.Исаева Е.И., Мазуркова Н.А., Скарнович М.О., Трошкова Г.П., Шишкина Л.Н., Подчерняева Р.Я. Оптимизация роллерного культивирования вакцинных штаммов вирусов гриппа А и В в культурах клеток MDCK и Vero при использовании компонентов растительного происхождения // Биотехнология. -2010. - № 6. - С. 21-27.
(Isaeva E.I., Mazurkova N.A., Skarnovich M.O., Troshkova G.P., Shishkina L.N., and Podchernyayeva R.Ya. Optimization of Roller Culturing of Influenza Virus Vaccine Strains in MDCK and Vero Cell Cultures using Plant Origin Components // Applied Biochemistry and Microbiology. – 2011. – V. 47. - № 8. – P. 737-743).
10. Исаева Е.И., Мазуркова Н.А., Подчерняева Р.Я. Иммуногенность синтетических фрагментов из области вариабельных и консервативного сайтов тяжелой цепи гемагглютинина вируса гриппа H3N2 // Биотехнология. - 2011. - № 1. - С. 14-22. (Isaeva E.I., Mazurkova N.A., Podchernyayeva R.Ya. Immunogenicity of Synthetic Fragments Corresponding to Variable and Concervative Sites of H3N2 Influenza Virus Hemagglutinin Heavy Chain //Applied Biochemistry and Microbiology. – 2011. – V. 47. - № 8. – P. 723-729).
11.Михайлова Г.Р., Мазуркова Н.А., Подчерняева Р.Я., Рябчикова Е.И., Трошкова Г.П., Шишкина Л.Н. Морфологическая и кариологическая характеристики клеток MDCK и Vero(В) при культивировании в питательных средах на основе растительных гидролизатов // Вопросы вирусологии. - 2011. -№ 2. - С. 9-14.
12.Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Шишкина Л.Н., Ставский Е.А., Дроздов И.Г. Создание питательной среды на основе гидролизата сои, полученного с использованием бромелаина, для клеток MDCK и Vero и оценка в них ростовых свойств вакцинных штаммов вируса гриппа // ЖМЭИ. – 2011. - № 1. – С. 86-90.
13.Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Шишкина Л.Н., Ставский Е.А., Руденко Л.Г. Использование растительных компонентов в роллерном культивировании вакцинного реассортантного штамма вируса гриппа H5N2 // ЖМЭИ. – 2011. -№ 2. – С. 88-92.
14.Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Шишкина Л.Н., Ставский Е.А., Руденко Л.Г. Иммуногенность образцов вакцинного штамма вируса гриппа H5N2, полученных при роллерном культивировании в средах с растительными компонентами // ЖМЭИ. – 2011. - № 3. – С. 48-52.
15.Шишкина Л.Н., Мазуркова Н.А., Терновой В.А., Булычев Л.Е., Туманов Ю.В., Скарнович М.О., Кабанов А.С., Рындюк Н.Н., Кузубов В.И., Миронов А.Н., Ставский Е.А., Дроздов И.Г. Оценка иммуногенности и безопасности гриппозной аллантоисной интраназальной живой вакцины «Ультрагривак» при двукратной иммунизации // ЖМЭИ. – 2011. - № 4. – С. 92-96.
16.Исаева Е.И., Мазуркова Н.А., Подчерняева Р.Я. Сравнительное изучение иммуногенности культуральных и пептидных противогриппозных вакцин // ЖМЭИ. – 2011. - № 5. – С. 44-50.
Патенты:
1. Сандахчиев Л. С., Нечаева Е. А., Вараксин Н. А., Рябичева Т. Г., Мазуркова Н. А., Гендон Ю. З., Маркушин С. Г., Акопова И. И., Коптяева И. Б. Способ получения живой культуральной вакцины против вируса гриппа // Патент РФ № 2330885, опубл. в БИ № 22 от 10.08.2008.
2. Трошкова Г.П., Мартынец Л.Д., Сумкина Т.П., Мазуркова Н.А. Питательная среда для культивирования клеток млекопитающих // Патент РФ № 2377295, опубл. в БИ № 36 от 27.12.2009.
Статьи в журналах и других изданиях: 1. Трошкова Г.П., Мазуркова Н.А., Сумкина Т.П., Мартынец Л.Д., Шишкина Л.Н., Карабинцева Н.О. Технология получения гидролизата сои с использованием протеолитического фермента бромелаина и оценка ростовых свойств питательной среды на его основе для перевиваемых культур клеток // Современные наукоемкие технологии. - 2010. - № 1. - С. 45-47.
2.Мазуркова Н.А. Иммуногенные свойства синтетических пептидных фрагментов гемагглютинина вируса гриппа A/H3N2 // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2011. - № 5. - С. 100-102.
3.Мазуркова Н.А., Скарнович М.О., Трошкова Г.П., Шишкина Л.Н. Оптимизация процесса сублимационного высушивания культуральных холодоадаптированных вакцинных образцов вируса гриппа A/H5N2 // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. -2011. - № 5. - С. 98-100.
4.Шишкина Л.Н., Мазуркова Н.А., Сергеев А.Н., Терновой В.А., Туманов Ю.В., Булычев Л.Е., Петрищенко В.А., Скарнович М.О., Кабанов А.С., Рындюк Н.Н., Панченко С.Г., Алейников Р.П., Ильина Т.Н., Миронов А.Н., Мельников С.Я., Кузубов В.И., Коровкин С.А., Дроздов И.Г. «Проведение 2-ой фазы клинических испытаний иммуногенности и безопасности гриппозной аллантоисной интраназальной живой вакцины «Ультрагривак» при двукратной иммунизации» // Достижения современной биотехнологии: Сб. науч. тр. /Под ред. проф. И.Г. Дроздова. - Новосибирск, 2008. - С. 103-111.
5.Подчерняева Р.Я., Данлыбаева Г.А., Мазуркова Н.А., Бакланова О.В., Честков В.В., Табаков В.Ю. Адаптация клеток MDCK к росту в мало- и бессывороточной питательных средах // Клеточные культуры . Информационный бюллетень. Выпуск 25, СПб: Изд-во Политехн. Ун-та, 2010, С.74-79.
Материалы конференций:
1.Мазуркова Н.А., Богрянцева М.П., Трошкова Г.П. Сухие стерильные малосывороточные питательные среды на основе гидролизатов для культивирования клеток млекопитающих // Материалы Международной научной конференции «Разработка и производство диагностических сухих питательных сред и микросистем», посвященной 70-летию НПО «Питательные среды», Махачкала, май 1998, С. 16-17.
2.Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Мартынец Л.Д., Богрянцева М.П. Бессывороточные и малосывороточные сухие стерильные питательные на основе ферментативных гидролизатов для культивирования клеток-продуцентов вирусных антигенов // Труды VII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф, 31 мая - 11 июня 1999, С. 220-221.
3. Мазуркова Н.А., Мартынец Л.Д., Богрянцева М.П., Кирова Е.В., Трошкова Г.П. Ростстимулирующие белки как компонент питательных сред для культивирования клеточных культур // Труды VIII Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф, 6-10 июня 2000, С. 95-96.
4.Трошкова Г.П., Богрянцева М.П., Юдин А.В., Мазуркова Н.А., Мартынец Л.Д. Некоторые аспекты производства и применения бессывороточной питательной среды на основе ферментативного гидролизата сои // Труды IX Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине и экологии», Украина, Крым, Гурзуф, 31 мая -11 июня 2001, С. 211-212.
5.Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Сумкина Т.П., Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Дроздов И.Г. Репродукция штаммов вируса гриппа в перспективных для производства культуральных вакцин клеточных линиях при использовании питательных сред и ферментов растительного происхождения // Биотехнология в Казахстане: Проблемы и перспективы инновационного развития: Междунар. Науч. - практич. конф., посвящ. 50-летию науч.- исслед. ин-та пробл. биол. Безопасности (19- 21 мая 2008 г., Алматы). – Алматы. – 2008. – Сб. – С. 282 – 283.
6.Мазуркова Н.А., Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Терновой В.А., Туманов Ю.В., Булычев Л.Е., Петрищенко В.А., Скарнович М.О., Кабанов А.С., Сергеев А.А., Панченко С.Г., Рындюк Н.Н., Кузубов В.И., Миронов А.Н., Мельников С.Я., Коровкин С.А., Дроздов И.Г. Результаты клинических испытаний иммуногенности и безопасности гриппозной аллантоисной интраназальной живой вакцины «Орвакс» при двукратной иммунизации людей в возрасте от 18 до 60 лет // Биотехнология в Казахстане: Проблемы и перспективы инновационного развития: Междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 50-летию науч.-исслед. ин-та пробл. биол. безопасности (19-21 мая 2008 г., Алматы). – Алматы. – 2008. – Сб. – С. 461 - 462.
7.Данлыбаева Г.А., Мазуркова Н.А., Матюшина Р.О., Трошкова Г.А., Подчерняева Р.Я. Использование питательной среды на основе гидролизата рисовой муки для культивирования клеток и определение чувствительности к вирусам гриппа // Биотехнология в Казахстане: Проблемы и перспективы инновационного развития: Междунар. науч.-практич. конф., посвящ. 50-летию науч.-исслед. ин-та пробл. биол. безопасности (19- 21 мая 2008 г., Алматы). – Алматы. – 2008. – Сб. – С.268 – 269.
8.Мазуркова Н.А. Проведение 2-й фазы клинических исследований гриппозной аллантоисной интраназальной живой вакцины «Орвакс» (тип A/H5N2) при двукратной иммунизации // Проблемы совершенствования природной, техногенной и пожарной безопасности населения и территорий муниципальных образований субъектов Российской федерации Сибирского федерального округа: Материалы науч.-практич. конф. (17 сент. 2008 г., Новосибирск). – Новосибирск, 2008. – С. 76 - 77.
9.Мазуркова Н.А., Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Булычев Л.Е., Терновой В.А., Туманов Ю.В., Петрищенко В.А., Сергеев А.А., Скарнович М.О., Кабанов А.С., Рындюк Н.Н., Панченко С.Г., Алейников Р.П., Ильина Т.Н., Миронов А.Н., Мельников С.Я., Кузубов В.И., Коровкин С.А., Дроздов И.Г. «Клинические исследования гриппозной аллантоисной интраназальной живой вакцины «Орвакс» (тип А/Н5N2)» // Тезисы в сборнике Международной научно-практической конференции «Проблемы совершенствования
межгосударственного взаимодействия в подготовке к пандемии гриппа», г. Новосибирск, 9-10 октября 2008 г. С. 76-78.
10.Катлинский А.В., Семченко А.В., Дроздов И.Г., Коровкин С.А., Миронов А.Н., Мельников С.Я., Дылдина Н.В., Руденко Л.Г., Мельников С.А., Черникова Н.К., Хамитова М.Ф., Сергеев А.Н., Шишкина Л.Н., Мазуркова Н.А., Кузубов В.И., Рындюк Н.Н., Голубев Д.А. Доклинические и клинические исследования живой препандемической вакцины против гриппа птиц // IX Межгосударственная научно-практическая конференция «Современные технологии в реализации глобальной стратегии борьбы с инфекционными болезнями на территории государств – участников Содружества Независимых Государств». – Волгоград. – 30 сентября – 2 октября 2008 г. – С. 89–90.
11.Рындюк Н.Н., Алейников Р.П., Кузубов В.И., Мазуркова Н.А., Шишкина Л.Н., Сергеев А.Н., Миронов А.Н., Мельников С.Я., Коровкин С.А. «Клиническое исследование живой аллантоисной интраназальной гриппозной вакцины «Ультрагривак» (тип А/Н5N2)» // Международная научно – практическая конференция (14-15 мая 2009 г., Новосибирск, Россия). – Новосибирск: Изд-во «ЦЭРИС», - 2009. – С. 261.
12.Рябчикова Е.И., Таранов О.С., Спицына Ю.Е., Гончаренко А.К., Мазуркова Н.А., Демина О.К. Вирус гриппа H5N1: инфекционный процесс in vitro и in vivo // Тезисы в сборнике Научной конференции «Медицинская геномика и протеомика», 9-13 сентября 2009 г., г. Новосибирск, Россия, С. 61.
13.Сумкина Т.П., Мартынец Л.Д., Мазуркова Н.А., Трошкова Г.П., Нечаева Е.А. Сравнительный анализ питательных сред на основе ферментативных гидролизатов соевой муки // Тезисы Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2010. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», Москва, 9-10 ноября 2010 г., С. 106-107.
14.Мазуркова Н.А., Дешева Ю.А., Шишкина Л.Н., Руденко Л.Г. Роллерная технология производства культуральной (MDCK) гриппозной вакцины с использованием растительных компонентов // Тезисы Международной научной конференции «Актуальные проблемы науки и образования», Куба, Варадеро, 20-31 марта 2011 г., «Международный журнал экспериментального образования, 2011, № 5. С. 38.
15.Мазуркова Н.А. Определение специфичности антигриппозных моноклональных антител с помощью синтетических пептидов // Тезисы Международной научной конференции «Приоритетные направления развития науки, технологии и техники», Италия (Рим), 10-17 апреля 2011 г., «Успехи современного естествознания», 2011, № 5, С. 115.
16.Мазуркова Н.А., Исаева Е.И., Трошкова Г.П., Шишкина Л.Н., Подчерняева Р.Я. Роллерное культивирование клеток MDCK и Vero в питательных средах на основе растительных гидролизатов для производства гриппозной вакцины // Тезисы Международной научной конференции «Инновационные медицинские технологии», Россия-Франция (Москва-Париж), 18-25 марта 2011 г., «Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований», 2011, № 8, С. 114.
17.Мазуркова Н.А., Сумкина Т.П., Трошкова Г.П. Разработка питательной среды на основе соевого гидролизата, полученного с использованием бромелаина, для клеток MDCK // Тезисы Международной научной конференции «Новые технологии, инновации, изобретения», Мальдивские острова, 16-23 марта 2011 г., «Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований», 2011, № 6, С. 38-39.