Бровко Федор Александрович

Научная тема: «РЕГУЛЯЦИЯ ТРАНСКРИПЦИИ ЦИТОКИНИН-СВЯЗЫВАЮЩИМ БЕЛКОМ 70Кд КУКУРУЗЫ»

Специальность: 03.01.05

Год: 2011

Отрасль науки: Биологические науки

Основные научные положения, сформулированные автором на основании проведенных исследований:

Обнаружено, что в этиолированных проростках кукурузы, для которых характерны активные процессы деления и дифференцировки клеток присутствует цитокинин-связывающий белок 70 кД (ЦСБ70). Разработаны три оригинальные схемы выделения ЦСБ70, позволившие получить функционально активный белок. Разработан высокочувствительный и специфичный иммунохимический метод определения ЦСБ70, на основе представительной панели моноклональных антител к ЦСБ70. Впервые изучена локализация ЦСБ70 в органах и тканях растения, показано его преимущественное содержание в меристематических зонах корня и стебля этиолированного проростка кукурузы. Впервые получены данные о динамике содержания ЦСБ70 при развитии этиолированного растения кукурузы. Разработаны условия иммуноцитохимического определения ЦСБ70 с помощью световой и электронной микроскопии. Впервые с помощью иммуноцитохимических методов определена внутриклеточная локализация и показано присутствие ЦСБ70 в ядре, ядрышке, цитоплазме, пластидах: этиопластах, амилопластах и хлоропластах. Показана связь между содержанием ЦСБ70 в пластидах и процессами их дифференцировки и, в особенности, образования их внутренних мембранн. Показана и охарактеризована способность ЦСБ70 регулировать цитокинин-зависимо элонгацию транскрипции как в ядерной системе, содержащей хроматин и РНК полимеразу I так и в пластидной. Установлено, что локализация ЦСБ70 в клетках соответствует проявлению им функциональной активности в цитокинин-зависимой регуляции транскрипции. Белки, родственные ЦСБ70 кукурузы, по функциональной активности и иммунохимически, обнаружены в ячмене, ржи пшенице и овсе, что указывает на принадлежность к общему для злаков семейству цитокинин-связывающих белков, обеспечивающих цитокинин-зависимую регуляцию транскрипции. Разработанные методы анализа ЦСБ70 и его локализации в клетках растения могут быть использованы при исследовании других белков растений. Все полученные результаты носят приоритетный характер.

Список опубликованных работ

Статьи в рецензируемых журналах

1.Бровко Ф.А., Заграничная Т.К., Лисина О.И. Метод разделения белков и фенольных соединений растительного экстракта гидрофобной хроматографией на Toyopearl HW60 // Биотехнология 1994. Т. 9/10 С. 15-18.

2.Бровко Ф.А., Заграничная Т.К., Бозиев Х.М., Липкин В.М., Каравайко Н.Н., Селиванкина С.Ю., Кулаева О.Н. Выделение и характеристика цитокинин-связывающего белка молекулярной массой 70 кД из этиолированных проростков кукурузы. // Физиология растений. 1996. Т. 43 С. 533-540.

3.Бровко Ф.А., Заграничная Т.К., Бозиев Х.М.Разделение белков и фенольных соединений в растительном экстракте фракционированием сульфатом аммония в присутствии небольших концентраций полиэтиленгликоля. Биотехнология 1996. Т. 7. С. 36-41.

4.Заграничная Т.К., Бровко Ф.А., Шепеляковская А.О., Бозиев Х.М., Липкин В.М. Моноклональные антитела к цитокинин-связывающему белку 70 кД из этиолированных проростков кукурузы. // Физиология растений. 1997. Т. С. 5-10.

5.Kulaeva O. N., Zagranichnaya T.K., Brovko F.A., Karavaiko N.N., Selivankina S.Yu., Zemlyachenko Ya.V., Hall M.A., Lipkin V. M., Boziev Kh. M. A new family of cytokinin receptors from cereales. // Febs Letters 1998. V. 423. P. 239-242.

6.Brovko F. A. and Zagranichnaya T.K. Separation of proteins from phenols in sereal leaf extract by hydrophobic interaction – ammonium sulfate fractionation. // Plant Physiol Biochem. 1998. V.36 P .773-777.

7.Шепеляковская А.О., Доронина Н.В., Ламан А.Г., Бровко Ф.А., Троценко Ю.А. Новые данные о способности аэробных метилотрофных бактерий синтезировать Цитокинины // Доклады Академии Наук 1999. Т. 368. С. 555-557.

8.Иванова Е.Г., Доронина Н.В., Шепеляковская А.О., Ламан А.Г., Бровко Ф.А., Троценко Ю.А. Факультативные и облигатные аэробные метилобактерии синтезируют цитокинины // Микробиология 2000. Т. 6 С. 764-769.

9.Бровко Ф.А., Шепеляковская А.О., Бурханова Э.А., Бозиев Х.М., Ламан А.Г., Васильева В.С., Холл М.А., Кулаева О.Н. Преимущественная локализация цитокинин-связывющего белка (70-кД) в апикальной меристеме корня. // Доклады Академии Наук 2002. Т. 381 №5 С. 684-686.

10.Шепеляковская А.О., Теплова И.Р., Веселов Д.С., Бурханова Э.А., Бозиев Х.М., Ламан А.Г., В.С.Васильева, Кудоярова Г.Р., Холл М.А., Бровко Ф.А., Кулаева О.Н.. Цитокинин-связывающий белок 70 кД преимущественно локализован в меристеме корня. Физиология Растений 2002. Т. 49. С. 133-120.

11.Костеша Н.В., Ламан А.Г., Шепеляковская А.О., Зайцева И.С., Орлов В.П., Дыкман Л.А., Бровко Ф.А., Соколов О.И. Селекция и характеристика фаговых мини-антител к актинам различного происхождения. Биохимия 2005. Т.70 С. 1070-1077.

12. Brovko FA, Vasil´eva VS, Shepelyakovskaya AO, Selivankina SY, Kudoyarova GR, Nosov AV, Moshkov DA, Laman AG, Boziev KM, Kusnetsov VV, Kulaeva ON. Cytokinin-binding protein (70 kDa): localization in tissue and cells of etiolated maize seedlings and its putative function. // J Exp Bot. 2007 V. 58 Р. 2479-2490.

13.Васильева В.С., Лушникова А.Л, Павлик Л.Л., Мошков Д.А., Бровко Ф.А. Разработка метода для иммуноцитохимического исследования цитокинин-связывающего белка 70 кД и его локализация в тканях проростка кукурузы. // Физиология Растений 2008. Т.55 С. 552-559.

14.Brovko FA, Vasil´eva VS, Lushnikova AL, Selivankina SY, Karavaiko NN, Boziev KM, Shepelyakovskaya AO, Moshkov DA, Pavlik LL, Kusnetsov VV, Kulaeva ON. Cytokinin-binding protein (70 kDa) from etioplast and аmyloplasts of etiolated maize seedlinds and chloroplast of green plants and its putative function. // J Exp Bot. 2010 V. 61 p.3461-74.

15.Романов Г.А., Таран В.Я., Оруджев Э.М., Кулаева О.Н., Бровко Ф.А., Липкин В.М. Способ обнаружения веществ с цитокиновой активностью. Патент SU 1808128 A3 (1993).

Статьи в научных сборниках и других изданиях

1.Romanov G.A., Orudgev B.M., Brovko F.A., Kulaava O.K. Cereal´ сytokinin-binding proteins belonging to putative receptor family recognize purine as well as phenylurea cytokinins. //14th International Conference of Plant Growth Substances: Amsterdam, 1991. p. 44.

2.Orudgev B.M., Taran Y.Ya., Brovko .A., Romanov O.A. Temporal and spatial distribution of soluble cytokinin binding proteins in cereals: its relation to cytokinin content and sensitivity. // 14th´ International Conference of Plant´s Growth Substances: Amsterdam, 1991. -p.51.

3.Karavaiko N. N., Selivankina S.Yu., Brovko F.A., Zemlyachenko Ya.V., Shipilova S. V., Zagranichnaya T.K., Lipkin V. M., Kulaeva O. N. Zeatin-binding proteins participating in cytokinin-dependent activation of transcripton. // In Plant Hormone signal perception and signal transduction Ed by Smith A.R., Berry A.W., J. Harpharm N.V., Moshkov I.E., Novikova G.V., Kulaeva O.N. and Hall M.A. Kluwer Academic Publ., Dordrecht. 1996 pp. 67-76.

4.Brovko F.A., Zagranichnaya T.K., Boziev Kh.M., Karavaiko N.N., Selivankina S.Yu., Lipkin V.M., Kulaeva O.N. A cytokinin-binding protein from maize coleoptiles. // International symposium on plant hormone signal perception and transduction 1994, P. 13. Moscow

5.Шепеляковская А.О., Заграничная Т.К., Бозиев Х.М., Бровко Ф.А. Тест-система для обнаружения цитокинин-связывающего белка (ЦСБ-70) в растительных экстрактах. // Физико-химические основы физиологии растений и биотехнология, 3-й Съезд общества физиологов растений 1997,. Москва Россия.

6.Заграничная Т.К., Шепеляковская А.О., Бровко Ф.А., Бозиев Х.М., Липкин В.М., Кулаева О.Н. Моноклональные антитела против ЦСБ-70 конкурируют с транс-зеатином за место связывания с рецептором. // «Физико-химические основы физиологии растений и биотехнология», 3-й Съезд общества физиологов растений 1997,. Москва Россия.

7.Шепеляковская А.О., Заграничная Т.К., Бозиев Х.М., Бровко Ф.А. Тест-система для обнаружения цитокинин-связывающего белка (ЦСБ70) в растительных экстрактах. «Физико-химические основы физиологии растений и биотехнология», 3-й Съезд общества физиологов растений 1997,. Москва Россия.

8.F.A.Brovko, T.K.Zagranichnaya, Kh.M.Boziev, A.O.Shepelyakovskaya, N.N.Anikeeva, O.N.Kulaeva. Investigation of structure and functuons of cytokinin-binding protein CBP-70 from etiolated maize shoots. // International Conference Molecular, Biochemical and Physiological Aspects of Plant Science, 1997, Moscow.

9.Шепеляковская А.О., Васильева В.С., Бозиев Х.М., Булгакова Е.В., Ламан А.Г., Бровко Ф.А., Кулаева О.Н. Иммунохимическое исследование рецептора цитокининов из этиолированных проростков кукурузы. Распределение по растению. IV Съезд общества физиологов растений России 1999, стр. 786. Москва, Россия.

10.Великов В.А., Ламан А.Г., Шепеляковская А.О., Ракова Н.Ю., Бровко Ф.А. Получение комбинаторных библиотек одноцепочных антител; селекция и характеристика миниантител к зеатин-рибозиду. // Иммуноанализ регуляторов роста в решении проблем физиологии растений, растениеводства и биотехнологии. 2000, стр. 5. Уфа, Россия.

11.Шепеляковская А.О., Васильева В.С., Бозиев Х.М., Ламан А.Г., Бурханова Э.А., Бровко Ф.А., Кулаева О.Н. // Иммуноанализ регуляторов роста в решении проблем физиологии растений, растениеводства и биотехнологии. 2000, стр. 12-13. Уфа, Россия.

12.The 12th Congress of the Federation of European Societies of Plant Physiology. Budapesht p.110, 2000.

13.Vasileva V.S., Pavlik L.L., Shepelyakovskaya A.O., Brovko F.A., Moshkov D.A., Kulaeva O.N. Immunocytochemical localization of cytokinin receptor CBP70 in root tips tissue of maize shoots. // Plant Signaling Systems of Plant Cells 2001 p. 56. Moscow.

14.V.A. Velikov, A.O. Shepelyakovskaya, A.G. Laman, P.G. Suvorova, F.A. Brovko. Production of miniantibodies against zeatin in bacterial cells. International Symposium Intracellular Signalling in Plant and animal Systems. Kyiv, Ukraine, 9-14 September, 2001.

15.Shepelyakovskaya A.O., Teplova L.P., Veselov D.S., Bukharova E.A., Boziev Kh.M., Kudoyarova G.R., Brovko F.A., Kulaeva O.N. Cytokinin-binding protein – CBP70: The content in the root tip of 4-day maize plants. // Plant Signaling Systems of Plant Cells 2001 p. 107. Moscow.

16.V.S.Vasilyeva, L.L.Pavlik, A.L. Senina, A.O.Shepelyacovskaya, F.A.Brovko, D.A. Moshkov, O.N. Kulaeva. Distribution of cytokinin receptor CBP-70 in maize shoot tissues and cells. International Symposium Intracellular Signalling in Plant and animal Systems. Kyiv, Ukraine, 9-14 September, 2001.

17.F.A.Brovko, A.O.Shepelyakovskaya, E.A. Burchanova, Kh.M. Boziev, A.G.Laman, V.S. Vasilyeva, M.A. Hall, O.N.Kulaeva. Predominant localization of cytokinine-binding protein (CBP-70) in the cell division zone of the apical root meristem. International Symposium Intracellular Signalling in Plant and animal Systems. Kyiv, Ukraine, 9-14 September, 2001.

18.Сенина Ф.Л., Васильева В.С., Долгих Ю.И., Бровко Ф.А. Исследование локализации ЦСБ70 во фракциях клеток суспензионной культуры кукурузы. // Рецепция и внутриклеточная сигнализация. 2003, стр. 299. Пущино, Россия.

19.Васильева В.С., Сенина А.Л., Шепеляковская А.О., Долгих Ю.И., Бровко Ф.А., Кулаева О.Н. ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛОКАЛИЗАЦИИ ЦСБ-70 В ОРГАНАХ И ТКАНЯХ ПРОРОСТКА КУКУРУЗЫ // V съезд Общества физиологов растений России, 2003, Пенза, Россия.

20.Васильева В.С., Лушникова А.Л., Шепеляковская А.О., Мошков Д.А., Павлик Л.Л., Бровко Ф.А., Кулаева О.Н. ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ ЦИТОКИНИН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА 70кД МЕТОДАМИ ЭЛЕКТРОННОЙ МИКРОСКОПИИ // VI съезд физиологов растений 2007, стр. 175-176. Сыктывкар, Россия.