Научная тема: «МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ ИНЖЕНЕРИЯ ШТАММОВ ESCHERICHIA COLI – БИОСЕНСОРОВ, ПРОДУЦЕНТОВ ЦИТОКИНОВ, ФАКТОРОВ РОСТА И НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ВЕЩЕСТВ.»
Специальность: 03.01.03
Год: 2013
Отрасль науки: Биологические науки
Основные научные положения, сформулированные автором на основании проведенных исследований:
Впервые сконструирована тест-система (SOS-lux test) для оценки генотоксичности химических веществ и физических факторов (γ- и UV- излучение), основанная на измерении SOS-ответа клеток E. coli на действие ДНК-повреждающих факторов, в которой в качестве гена-"репортера" использован оперон биолюминесценции P. leiognathi под контролем промотора гена cda плазмиды ColD. Тест применялся при оценке генотоксичности и общей токсичности ряда соединений платины, проявляющих противоопухолевую активность, в частности цис-ДДП и циклоплатама. Сконструированная тест-система нашла широкое применение при исследованиях общетоксических и мутантных свойств поллютантов (см. например, Масленникова (ИЭГМ, УроРАН), 2007, Кхатаб З.С. (Южный федеральный университет, г. Ростов-на-Дону), автореф. дисс., 2013; Е. П. Гуськов, и др., (НИИ биологии при ЮФУ, г. Ростов-на-Дону), 2009); при разработке следующего поколения биосенсоров для оценки генотоксичности (SOS-LUX-LAC-FLUORO test (Rabbow E. et al, 2003, Horneck G et al., 2010 (DLR, Institute of Aerospace Medicine, Cologne, Germany)). Данная часть работы частично финансировалась в 1995-1997 г.г. грантами INTAS (93-2850) и COPERNICUS (CIPA CT-94 0122, European Commission).

Сконструирован ряд E. coli штаммов-продуцентов цитокинов и факторов роста (IL-3, IL-4, IL4-δ2, IL-10, GDNF, KGF, hlL-1ra, EGF человека; γ-интерферона быка (bIFN-γ)) с использованием синтетических или полусинтетических генов данных белков. Высокоэффективная продукция белков достигалась с использованием следующих генно-инженерных подходов: а) оптимизация силы промоторов и использование высокоэффективных рибосом-связывающих последовательностей, б) строгая регуляция транскрипции, в) модификация первичной структуры mRNA белков для оптимизации трансляции, г) предотвращение протеолиза целевых продуктов путем использования штаммов E. coli дефектных по некоторым протеазам, д) цитоплазматическая продукция белков в виде телец включения, продукция белков в виде их гибридных вариантов,  или, в случае EGF, экстраклеточная продукция целевого белка. Разработаны методы выделения и очистки некоторых субстанций белков.

Субстанции белков hIL-4 и hIL-4δ2 использовались в Институте инженерной иммунологии для структурно-функциональных исследований рекомбинантного делеционного варианта интерлейкина-4; hIL-4δ2 передан в Институт Цитологии Новосибирского отделения РАМН для изучения роли этого цитокина в ткане-специфической регуляции иммунных реакций на разных этапах онтогенетического развития. Штамм-продуцент рекомбинантного hGDNF передан в НПЦ «Фосфосорб» для дальнейших исследований по изучению возможности создания на его основе эффективных лекарственных биопрепаратов. Биологически активные субстанции hEGF и hKGF применялись при выращивании аллогенных эпидермальных пластов (Институт биологии развития РАН) с последующей их трансплантацией больным при глубоких ожогах и незаживающих трофических язвах. Высокоэффективные штаммы продуценты рекомбинантного hIL-lга были переданы в ГНЦ РФ ГосНИИОЧБ (СанктПетербург), где впоследствии были разработаны методы выделения и очистки целевого белка в препаративных количествах, показана биологическая активность hIL-l ra и начаты доклинические испытания препарата. Штамм E. coli BL21(DE3) (pET-22-blFN-γ) был передан в АО «МосАгроГен» для разработки промышленного регламента выделения и очистки рекомбинантного γ-интерферона быка с целью последующего создания комбинированных препаратов ветеринарного назначения на основе природных и рекомбинантных интерферонов и цитокинов.

Показана возможность усиления потребления глюкозы штаммами E. coli при экспрессии в них мутантной пермеазы PtsG или при усиленной экспрессии пермеазы EIINag. Возможность интенсивного усвоения глюкозы клетками E. coli посредством пермеазы EIINag была показана впервые.

Получены новые мутантные варианты алкоголь дегидрогеназы-альдегид дегидрогеназы E. coli (AdhE), обеспечивающие рост клеток на средах с этанолом в качестве единственного источника углерода в аэробных условиях культивирования.

Введение мутантных генов adhE под контролем сильного промотора в хромосому штаммов-продуцентов (например, треонина или глутаминовой кислоты) позволяет получить аминокислоту при росте клеток на средах с этанолом в качестве единственного источника углерода. Теоретически показаны необходимые модификации пути гликолиза для эффективной продукции аминокислоты при использовании в ростовых средах смесей глюкоза/этанол (на примере штамма-продуцента треонина).

Получены новые варианты мутантных N-ацетилглутамат синтетазы и карбамоилфосфат синтетазы E. coli, ключевых ферментов пути биосинтеза аргинина, резистентных к ретроингибированию. Гены мутантных ферментов использованы при конструировании высокопродуктивных штаммов-продуцентов аминокислоты.

Впервые идентифицированы гены (и охарактеризованы соответствующие белки) одного из путей деградации путресцина в GABA в E. coli. Данный путь в базе данных EcoCyc получил наименование пути I деградации путресцина (pathway: putrescine degradation I).

Скрининг более ста препаратов этанольных экстрактов растений, произрастающих на территории России, проведенный с использованием in vitro тестов: 1) ингибирование ангиотензинпревращающего фермента ACE I; 2) ингибирование продукции TNF-α и PGE2 клетками моноцитов человека THP-1; 3) оценка антиоксидантной активности (DPPH тест); 4) ингибирование панкреатической липазы (HPL) человека; 5) активация фосфорилирования 5´-АМФ-активируемой протеинкиназы (AMPK) - выявил препараты с высокой специфической активностью в данных тестах.

Несколько экстрактов показали высокую активность в более чем одном тесте: экстракт соплодий ольхи - в DPPH и ACE I тестах, экстракт из корневищ бадана - в HPL and ACE I тестах, экстракт грушанки круглолистной - в AMPK и PGE2 тестах.

Идентифицированы индивидуальные вещества, высокоактивные в указанных выше тестах: а) из экстракта соплодий ольхи выделены глутиноин (соединение обнаружено и структура идентифицирована впервые), педункулагин и праекоксин Д, показавшие антиоксидантную активность в DPPH тесте сравнимую с активностью таких известных антиоксидантов, как галловая и аскорбиновая кислоты; б) из корневищ бадана выделены (+)-катехин 3,5-ди-O-галлат (обнаружен и структура идентифицирована впервые) и (+)-катехин 3-O-галлат, показавшие высокую антиоксидантную и HPL ингибирующую активности, сравнимые с известными препаратами антиоксидантов и липазных ингибиторов растительного происхождения; в) в экстракте грушанки круглолистной обнаружен 2-метил-7-гидроксиметил-1,4-нафтохинон, для которого впервые была показана способность индуцировать фосфорилирование АМРК в дифференцированных клетках миобластов мыши C2C12. Этот активатор AMPK сравним по активности с ресвератролом или гинзенозидом и может быть перспективен в качестве компонента функционального питания.

Возможность микробиологического синтеза идентифицированных соединений обсуждается с учетом достигнутых в последние годы успехов в метаболической инженерии путей биосинтеза метаболитов - предшественников флавононов, биосинтеза флаванонов и флавонолов в клетках E. coli.  

Список опубликованных работ
1.Птицын Л.Р., Гуревич В.Б., Барсанова Т.Г., Шендеров А.Н., Хайкинсон М.Я., Степанов А.И. Клонирование и инсерционный мутагенез фрагмента ДНК, кодирующего люминесцентную систему Photobacterium leiognathi. Молекул. генетика, микробиол. и вирусол., 1988, №10, 17-19.

2.Птицын Л.Р., Фатова М.А., Степанов А.И Экспрессия генов биолюминесцентной системы Photobacterium leiognathi в Escherichia coli. Молекул. генетика, микробиол. и вирусол., 1990, №2, 26-29.

3.Луценко С.В., Гуревич А.И., Птицын Л.Р., Рязанова Л.А., Смирнов В.А Системы экспрессии в E.coli рекомбинантного интерлейкина-3. Биоорганическая химия, 1992, т.18, №3, 391-397.

4.Птицын Л.Р., Альтман И.Б. Рекомбинантные штаммы Escherichia coli, обеспечивающие высокий уровень экспрессии интерлейкина-3 и интерлейкина-4 человека. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1995, №1, 83-85.

5.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Гуров М.В., Куркин А.Н. Экспрессия интерлейкина-10 человека в клетках E. coli. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1995, №3, 324-327.

6.Птицын Л.Р. Биолюминесцентный анализ SOS-ответа клеток Escherichia coli. Генетика, 1996, т.32, №3, 354-358.

7.Рязанова Л.А., Птицын Л.Р., Иванов В.Б., Быстрова Е.И., Яковлев К.И., Рожкова Н.Д Сравнительная оценка генотоксическогодействия комплексных соединений платины в про- и эукариотических тест-системах. Доклады Академии Наук, 1996, т.350, № 2, 259-262.

8.Евдокимова А.А., Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Фомин Б.А., Калужский В.Е., Машко С.В Использование высокоэффективной системы транскрипции бактериофага Т7 для создания штамма E.coli – продуцента рекомбинантного гамма-интерферона быка. Биотехнология, 1996, №10, 3-11.

9.Rettberg P; Horneck G; Krasavin E; Komova O; Ptitsyn L., Kozubeck S. Plasmid und damit transformierter Mikroorganismus fur ein Verfahren zur luminometrischen Bestimmung der mutagenen und/oder karzinogenen Potenz eines Agens. Deutsches Patent, N 19544374, (20-02-1997), 8p.

10.Птицын Л.Р., Рязанова Л.А., Иванов В.Б. Применение recF мутантных штаммов Escherichia coli для анализа генотоксичности комплексных соединений платины. Генетика, 1997, т.33, №7, 1020-1024.

11.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Рогожкина Е.В., Ломакин И.Б., Винецкий Ю.П., Кетлинский С.А., Симбирцев А.С., Машко С.В. Эффективный биосинтез рекомбинантного рецепторного антагониста интерлейкина-1 человека в клетках Escherichia coli. Биотехнология, 1997, №1, 3-11.

12.Альтман И.Б., Птицын Л.Р., Смирнов С.В., Калужский В.Е., Машко С.В. Создание штамма-продуцента рекомбинантного γ-интерферона быка, пригодного для эффективного биотехнологического производства. Биотехнология, 1997, №11-12, 3-13.

13.Ptitsyn L., Horneck G, Komova O, Kozubek S, Krasavin EA, Bonev M, Rettberg P. A biosensor for environmental genotoxin screening based on an SOS lux assay in recombinant Escherichia coli cells. Appl Environ Microbiol., 1997, v.63, N11:4377-84.

14.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Гуров М.В. Экспрессия синтетического гена интерлейкина-10 человека и его вариантов в клетках E. coli. Биоорганическая химия, 1998, т.24, №1, 48-57.

15.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Гуров М.В. Васильев А.В., Воротеляк Е.А., Терских В.В. Продукция рекомбинантного фактора роста кератиноцитов человека в клетках Escherichia coli. Биоорганическая химия, 1998, т.24, №7, 523-529.

16.Rettberg P; Horneck G; Krasavin E; Komova O; Pticyn L.R., Kozubeck S. Verfahren zur luminometrischen Bestimmung der mutagenen und/oder karzinogenen Potenz einer zu untersuchenden Probe oder eines zu untersuchenden Faktors (Agens). Deutsches Patent, N 19549417 (13-08-1998), 8p.

17.Rettberg P., Baumstark-Khan C., Bandel K., Ptitsyn L.R., Horneck G., Microscale application of the SOS-LUX-test as biosensor for genotoxic agents. Analytica Chimica Acta, 1999, v.387, 289-296.

18.Птицын Л.Р., Смирнов С.В., Альтман И.Б., Самсонова Н.Н., Ходякова А.В., Василенко Р.Н Продукция рекомбинантного IL-4δ2 – природной изоформы интерлейкина-4 человека, в клетках Escherichia coli. Биоорганическая химия, 1999, т.25, №8, 623-629.

19.Птицын Л.Р., Альтман И.Б. Экстраклеточная продукция рекомбинантного эпидермального фактора роста человека (hEGF) в клетках Escherichia coli. Биоорганическая химия, 1999, т.25, №12, 923-929.

20.Samsonova NN, Smirnov SV, Altman IB, . Ptitsyn L.R. Molecular cloning and characterization of Escherichia coli K12 ygjG gene. BMC Microbiol., 2003, v.3, N1:2, 1-10.

21.Гусятинер М.М.; Козлов Ю.И.; Птицын Л.Р., Альтман И.Б.; Ворошилова Э.Б.; Йомантас Ю-А В; Ямпольская Т.А Cпособ получения L-аминокислоты методом ферментации, штамм бактерии Escherichia coli - продуцент L-аминокислоты (варианты) RU 2207376 (27. 06. 2003), 7c.

22.Vasiliev AM, Vasilenko RN, Kulikova NL, Andreev SM, Chikileva IO, Puchkova GY, Kosarev IV, Khodyakova AV, Khlebnikov VS, Ptitsyn LR, Shcherbakov GY, Uversky VN, DuBuske LM, Abramov VM. Structural and functional properties of IL-4δ2, an alternative splice variant of human IL-4. J Proteome Res., 2003, v.2, N3:273-81.

23.Гусятинер М.М.; Леонова Т.В.; Птицын Л.Р., Ямпольская Т.А. Cпособ получения L-аргинина, штамм Escherichia coli - продуцент L-аргинина. RU 2208640 (20.07.2003), 4c.

24.Птицын Л.Р., Альтман И.Б.; Смирнов С.В.; Ростова Ю.Г.; Ямпольская Т.А.; Леонова Т.В.; Гусятинер М.М. Мутантная N-ацетилглутамат синтаза (варианты), фрагмент ДНК, штамм бактерии Escherichia coli - продуцент аргинина (варианты) и способ получения L-аргинина. RU 2215783 (10. 11. 2003), 7c.

25.Gusyatiner M M, Kozlov Yu I, Ptitsyn L R, Altman I B, Voroshilova E B, lomantas Y A V, Yampolskaya T A. Method for producing L-amino acids by fermentation of an Escherichia strain which is transformed with a pyruvate carboxylase-encoding gene from Bacilus subtilis. EP 1092776 (07-07-2004), 26p.

26.Ptitsyn L R, Altman I B, Smirnov S V, Rostova Y G, Yampolskaya T A, Leonova T V, Gusyatiner M M. Mutant N-acetylglutamate synthase and method for L-arginine production.USA Patent 6,790,647 (14.09.2004), 13p.

27.Gusyatiner M M, Leonova T V, Ptitsyn L R, Yampolskaya T A.. L-arginine producing Escherichia coli and method of producing L-arginine. USA Patent 6,841,365 (11.01.2005), 5p.

28.Gronskiy SV, Zakataeva NP, Vitushkina MV, Ptitsyn LR,Altman IB, Novikova AE, Livshits VA. The yicM (nepI) gene of Escherichia coli encodes a major facilitator superfamily protein involved in efflux of purine ribonucleosides. FEMS Microbiol Lett., 2005, v.250, N1:39-47.

29.Gusyatiner M M, Kozlov Yu I, Ptitsyn L R, Altman I B, Voroshilova E B, lomantas Y A V, Yampolskaya T A Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren mittels Fermentation eines Escherichia Stammes, transformiert mit einem Pyruvat-carboxylase Gen aus Bacillus subtilis DE 60011974 (10-03-2005), 25p.

30.Ptitsyn L R, Altman I B, Smirnov S V, Rostova Y G, Yampolskaya T A, Leonova T V, Gusyatiner M M. Neue N-Acetylglutamatsynthase-Mutante und ein Verfahren zur Herstellung von L-Arginin. DE 60106526 (18-08-2005), 15 p.

31.Samsonova NN, Smirnov SV, Novikova AE. Ptitsyn LR. Identification of Escherichia coli K12 YdcW protein as a gamma-aminobutyraldehyde dehydrogenase. FEBS Lett., 2005, v.579, N19:4107-12.

32.Kutukova EA, Livshits VA, Altman IP, Ptitsyn LR, Zyiatdinov MH, Tokmakova IL, Zakataeva NP. The yeaS (leuE) gene of Escherichia coli encodes an exporter of leucine, and the Lrp protein regulates its expression. FEBS Lett., 2005. v.579, N21:4629-34.

33.Птицын Л.Р., Смирнов С.В., Альтман И.Б., Новикова А.Е., Котлярова В.А., Гусятинер М.М., Ростова Ю.Г., Ямпольская Т.А. Новая мутантная карбамоилфосфатсинтетаза и способ продукции соединений - производных карбамоилфосфата. RU 2264459 (20.11.2005), 22 c.

34.Ptitsyn L R, Smirnov S V, Altman I B, Novikova A E, Kotliarova V A, Gusyatiner M M, Rostova Y G, Yampolskaya T A. Mutant carbamoylphosphate synthetase and method for producing compounds derived from carbamoylphosphate. USA Patent 6,991,924 (31.01.2006), 25p.

35.Gusyatiner M M, Kozlov Yu I, Ptitsyn L R, Altman I B, Voroshilova E B, lomantas Y A V, Yampolskaya T A. Fermentation method of producing L-amino acid. CN 1247783 (29.03. 2006), 30p.

36.Gusyatiner M M, Leonova T V, Ptitsyn L R, Yampolskaya T A. L-arginine producing Escherichia coli and method of producing L-arginine. USA Patent 7,052,884 (30.05.2006), 5p.

37.Смирнов С.В., Котлярова В.А., Альтман И.Б., Птицын Л.Р. Получение мутантов карбамоилфосфатсинтетазы Escherichia coli методом мутагенеза с помощью рандомизированных олигонуклеотидов. Биотехнология, 2006, №1, 3-11.

38.Птицын Л.Р., Альтман И Б, Смирнов С В, Самсонова Н Н, Ермишев В Ю. Бактерия, принадлежащая к роду Escherichia, - продуцент L-аргинина и способ получения L-аргинина. RU 2276686 (20.05.2006), 10c.

39.Ахвердян В З, Саврасова Е А, Самсонова Н Н, Ермишев В Ю, Альтман И Б, Птицын Л.Р., Бактерия, принадлежащая к роду Escherichia - продуцент L-треонина и способ получения L-треонина. RU 2288264 (27.11.2006), 21c.

40.Ptitsyn L R, Altman I B, Smirnov S V, Rostova Y G, Yampolskaya T A, Leonova T V, Gusyatiner M M. Mutant N-acetylglutamate synthase and method for L-arginine production. USA Patent 7,169,586 (30.01 2007), 10p.

41.Ptitsyn L R, Smirnov S V, Altman I B, Novikova A E, Kotliarova V A, Gusyatiner M M, Rostova Y G, Yampolskaya T A. Mutant carbamoylphosphate synthetase and method for producing compounds derived from carbamoylphosphate. USA Patent 7,211,419 (01.05.2007), 24p.

42.Птицын Л.Р., Альтман И Б; Котлярова В А; Козлов Ю И. Способ получения L-аминокислот с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia. RU 2312893 (20.12.2007), 89c.

43.Gusyatiner M M, Kozlov Yu I, Ptitsyn L R, Altman I B, Voroshilova E B, lomantas Y A V, Yampolskaya T A. Bacterium belonging to the genus Escherichia being transformed by the gene encoding pyruvate carboxylase and which produces L-amino acid, and fermentative method for producing L-amino acid. SK 285997 (07-01-2008), 22p.

44.Gusyatiner M M, Leonova T V, Ptitsyn L R, Yampolskaya T A. Escherichia coli generating L-arginine and method for production L-arginine. CN 100365115 (30-01-2008), 9p.

45.Gusyatiner M M, Leonova T V, Ptitsyn L R, Yampolskaya T A. L-arginine producing Escherichia coli and method of producing L-arginine. EP 1170358 (14-05-2008), 8p.

46.Котлярова В А; Птицын Л.Р., Альтман И Б; Козлов Ю И. Мутантная IIB/IIC субъединица глюкозоспецифической пермеазы системы PTS, фрагмент ДНК, бактерия, принадлежащая к роду Escherichia, - продуцент L-треонина и способ получения L-треонина. RU 2335536 (10.10.2008), 60c.

47.Альтман И.Б., Птицын Л.Р., Способ получения L-треонина с использованием бактерии, прина-длежащей к роду Escherichia, в которой инактивирован ген lrhA. RU 2337956 (10.11.2008), 23c.

48.Ptitsyn L R, Altman I B, Kotliarova V A, Kozlov Y I. Method for producing L-amino acids using bacterium of the Enterobacteriaceae family. EP 1853714 (26-11-2008), 63p.

49.Gusyatiner M M, Leonova T V, Ptitsyn L R, Yampolskaya T A. Escherichia coli productora de L-arginina y procedimiento para producir L-arginina. ES 2305015 (01-11-2008), 7p.

50.Птицын Л.Р., Альтман И Б, Котлярова В А, Мохова О Н, Ямпольская Т А, Козлов Ю И., Terashita M., Usuda Y., Matsui K. Способ получения L-аминокислот с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae RU 2364628 (20.08.2009), 69c.

51.Альтман И.Б., Птицын Л.Р. Способ получения L-треонина с использованием бактерии, прина-длежащей к роду Escherichia, в которой инактивирован ген yahN. RU 2392322 (20.06.2010), 14c.

52.Ямпольская Т.А., Стойнова Н.В., Ерёмина Н.С., Альтман И.Б., Птицын Л.Р. Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии, принадлежащей к роду Escherichia (ydbK gene). RU 2395579 (27.07.2010), 65c.

53.Akhverdian V Z; Savrasova E A; Samsonova N N; Ermishev V Y; Altman I B; Ptitsyn L R. Method for producing L-threonine using bacteria belonging to the genus Escherichia. CN 1997747 (08-12-2010), 21p.

54.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Ямпольская Т.А. Способ продукции полезного метаболита. RU 2408731 (10.01.2011), 89c.

55.Ivanov SA, Nomura K, Malfanov IL, Sklyar IV, Ptitsyn LR Isolation of a novel catechin from Bergenia rhizomes that has pronounced lipase-inhibiting and antioxidative properties. Fitoterapia, 2011, v82 N2:212-218.

56.Ptitsyn LR, Nomura K, Sklyar IV, Ravcheeva AB The 1,4-naphthoquinone derivative from Pyrola rotundifolia activates AMPK phosphorylation in C2C12 myotubes. Fitoterapia, 2011 v82 N8:1285-1289.

57.Ivanov SA, Nomura K, Malfanov IL, Ptitsyn LR. Glutinoin, a novel antioxidative ellagitannin from Alnus glutinosa cones with glutinoic acid dilactone moiety. Nat Prod Res., 2012 v26, N19, 1806-1816.

58.Altman I B, Ptitsyn L R, Method for producing L-threonine using bacterium of Enterobacteriaceae family, having attenuated expression of the yahN gene. EP 2185683 (18.04.2012), 23p.

59.Ivanov S.A., Garbuz S.A., Malfanov I.L., Ptitsyn LR. Screening of Russian medicinal and edible plant extracts for Angiotensin I-converting enzyme (ACE I) inhibitory activity. Химия pастительного сырья, 2012, №2, 165-172.

60.Kalinkevich K., Karandashov V.E., Ptitsyn LR. In vitro study of the anti-inflammatory activity of some medicinal and edible plants growing in Russia. Химия pастительного сырья, 2013, №1, 113-118.

Статьи в сборниках:

61.Komova O.V., Krasavin E.A., Kozubek S., Ptitsyn LR, Egorov P.E., Yufang W. SOS-response in UvrD and UmuC mutants of E.coli cells after UV and γ-irradiation. In "Radiation Biology and its Application in Space Research"(Eds.: S.Kozubek and G Horneck), Kiramo, 1995, 121-125.

62.Horneck G., Ptitsyn LR., Rettberg P., Komova O., Kozubeck S., Krasavin E.A. Monitoring of Genotoxicity, 5.1. Recombinant Escherichia coli cells as biodetector system for genotoxins. In ‘Biosensors for Environmental Diagnostics”, Ed. by B.Hock, D.Barcelo, K.Cammann, et.al., Stuttgart. Leipzig, 1998, p.215-232

63.Rink H, Yang TC, Böhm L, Govorun R, Häder DP, Horneck G, Kaina B, Kozubek S, Liu SZ, Potten C, Ptitsyn L. Cellular Responses, recommendations for future research needed. Fundamentals for the Assessment of Risks from Environmental Radiation, (Baumstark-Khan C. et al. (eds.)), 1999, Kluwer Academic Publishers. Netherlands, 1999, 339-344

64.Ptitsyn LR. A biosensor for environmental genotoxins, chemical mutagens and radiation factors, based on the SOS response function of Escherichia coli. Fundamentals for the Assessment of Risk from Environmental Radiation, (Baumstark-Khan C. et al. (eds.)), 1999, Kluwer Academic Publishers. Netherlands, 161-166

65.Vasilenko R., Vasiliev A., Chikileva I., Khodyakova A., Puchkova G., Kulikova N., Kosarev I., Andreev S., Ptitsyn L., Pavlov V., Khlebnikov V., Uversky V., Kiselevsky M., Abramov V. IL-4 and IL-4delta2 system in host defense mechanism against allergic and tumor diseases. Proceedings of the 2nd International Conference on “Tumor Microenvironment. Progression, Therapy&Prevention”. Monduzzi Editore (International Proceeding Division) Edit. I.P.Witz., 2002, 115-119.

Материалы конференций, конгрессов и симпозиумов:

66.Птицын Л.Р., Кондрашова М.А., Степанов А.И. Анализ SOS-ответа клеток E.coli с помощью бактериальной люминесценции. Всесоюзная научная конференция «Генетические последствия действия биологических и химических факторов окружающей среды по проблеме «Человек и Биосфера»», 1988, Киев, 95

67.Птицын Л.Р., Кондрашова М.А., Ингель Ф.И., Ревазова Ю.А., Степанов А.И. Действие генотоксических веществ на SOS-индуцируемую биолюминесценцию в E.coli. Всесоюзная научная конференция «Генетические последствия действия биологических и химических факторов окружающей среды по проблеме «Человек и Биосфера»», 1988, Киев, 96

68.Птицын Л.Р. Экстраклеточная продукция эпидермального фактора роста человека (hEGF) клетками E. coli. V Конференция РФ «Новые направления биотехнологии», Пущино, 1992, 35

69.Рязанова Л.А., Альтман И.Б., Птицын Л.Р., Батчикова Н.В. Экспрессия синтетического гена интерлейкина-4 человека в рекомбинантных штаммах E. coli. V Конференция РФ «Новые направления биотехнологии», Пущино, 1992, 38

70.Птицын Л.Р., Альтман И Б. Продукция эпидермального фактора роста человека (hEGF) клетками Escherichia coli. VI Конференция РФ «Новые направления биотехнологии», Пущино, 1994, 112

71.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Куркин А.Н., Гуров М.В. Химико-ферментативный синтез гена интерлейкина-10 человека и экспрессия его в клетках E. сoli. VI Конференция РФ «Новые направления биотехнологии», Пущино, 1994, 113

72.Птицын Л.Р., Рязанова Л.А. Биолюминесцентный анализ SOS-ответа с использованием Rfa-мутантов Escherichia coli. VI Конференция РФ «Новые направления биотехнологии», Пущино, 1994, 115

73.Рязанова Л.А., Птицын Л.Р., Иванов В.Б. Индукция SOS-ответа клеток Escherichia coli при действии соединений платины (II). VI Конференция РФ «Новые направления биотехнологии», Пущино, 1994, 117

74.Ptitsyn LR, Altman I.B., Vasiliev A.V., Terskikh V.V. Production of recombinant growth factors and its using for keratinocyte grafting. Baev International Conference of Biotechnology, Moscow, Russia, 1996, p.312.

75.Rettberg P., Ptitsyn L. R., Komova O., Kozubek S., Krasavin E., BonevM., Horneck G. The SOS lux test for the detection of genotoxic agents. 7-th Imternational Conference on Environmental Mutagens. SOS Chromotest Workshop at the 7th ICEM Meeting, Toulouse (France) 7-12 Sept. 1997 (Mutation Research, 1997, v.379, Issue1, Suppl.1, S206)

76.Vasilenko R., Khodyakova A., Chernovskaya T., Vasiliev A., Ptitsyn L, Puchkova G., Rudenko E., Abramov V., Zav’yalov V. Antiproliferative properties of the recombinant aglycosilated alternative interleukin-4 splice variant, IL-4δ2. 2nd Joint Meeting of the ICS and the ISICR, 1998, Jerusalem, Israel. (In Eur.Cytokine Network, 1998, v.9, N3, 437)

77.Ptitsyn L. R., Altman IB, Smirnov SV, Uvarov V.Yu., LyashenkoA.A., Markin S.S. Design and analysis of the E.coli produced strains of the recombinant glial-cell-line-derived neurotrophic factor (GDNF). 2nd Joint Meeting of the ICS and the ISICR, 1998, Jerusalem, Israel. (In: Eur.Cytokine Network, 1998, v.9, N3, 480)

78.Птицын Л.Р., Альтман И.Б., Смирнов С.В., Уваров В.Ю., Ляшенко А.А. Получение рекомбинантного нейротрофина глиального происхождения на базе штамма-продуцента E.coli. VI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», 1999, Москва, 462

79.Vasilenko R. N., Puchkova G. Yu., Kosarev I. V., Khodyakova A. V., Vasiliev A. M., Chikileva I. O., Sharova N. I., Yarilin A. A., Ptitsyn L. R., Abramov V. M. IL-4 and IL-4delta2 as a system of immune response regulation. (In: J. Interferon&Cytokine Res. - 2001. - vol. 21. - P-l-53

80.Vasilenko R., Puchkova G., Chikileva I., Khodyakova A., Ptitsyn L., Vasiliev A., Pchelinzev S., Abramov V. IL -452 takes part in regulation of Thl and Th2 type immune response. (In: Intern. J. Immunorehabilitation, 2001, vol 3. p 33).

81.Tuguz A. R., Abramov V. M., Vasilenko R. N., Chikileva I. O., Buydenok Y. V., Kiselevsky M. V., Ptitsyn L. R., Vasiliev A. M. Influence of IL-4d2 - IL-4 form derived by alternative splicing, on cytotoxicity of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) and granulocytes towards NK-sensitive K-562 cell line. Eighteenth UICC International Cancer Conference June 30–July 5, Oslo, Norway, 2002 (In: Intern. J. Cancer (Suppl), 2002, p. 445)

82.Самсонова Н. Н., Смирнов С. В., Альтман И. Б., Птицын Л.Р. Изучение регуляции, транскрипции и функциональная характеристика продукта трансляции гена ygjG E. сoli К12. 6-я Пущинская школа-конференция молодых ученых, 2002, 315

83.Самсонова Н Н, Смирнов С В, Альтман И Б, Птицын Л.Р. Идентификация гена Escherichia coli K12, кодирующего путресцин аминотрансферазу. Научная сессия МИФИ-2003. Сб. научных трудов, т.5, 32-33

84.Samsonova NN, Smirnov SV, Altman IB, Ptitsyn L. R., Characterization of Escherichia coli YgjG protein as putrescine:2-oxoglutarate aminotransferase with broad substrate specificities. 1st FEMS congress of European Microbiologists, 2003, Ljubljana, Slovenia, (In FEMS Letters, 2003, v.222(S), 346)

85.R. Vasilenko, I. Chikileva, A. Khodyakova, G. Puchkova, N. Kulikova, A. Vasiliev, I. Kosarev, V. Khlebnikov, M. Kiselevsky, L. Ptitsyn, L. DuBuske, and V. Abramov. Immunoregulatory properties of IL-4 and IL-4δ2 system. Eleventh International Cytokine Society Conference, Dublin, Ireland, 2003, Abstract N 243 (in: European Cytokine Network. 2003, v.14, N.3, p. 89).

86.Ptitsyn L. R., Smirnov SV, Kotlyarova VA, Altman IB. Random oligonucleotide mutagenesis of Escherichia coli argA gene and selection of high active N-acetylglutamate synthetase mutants. 30th FEBS Congress “The Protein World”, 2005, Budapest, Hungary (In The FEBS Journal, 2005, v.272, Suppl.1, 515)

87.Smirnov SV, Kotlyarova VA, Altman IB, Ptitsyn L. R. Constructing of feedback resistant E.coli carbamoylphosphate synthetase mutants by random oligonucleotide mutagenesis. 3rd Moscow International Congress “Biotechnology:state of art and prospects of development”, 2005, Moscow, Russia, 317